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碘化丙啶(PI)染液(即用型)

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  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：150T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：碘化丙啶(PI)染液(即用型)現貨供應，價格實惠。

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標簽:碘化丙啶(PI)染液(即用型) 150T 

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碘化丙啶(PI)染液(即用型)

PI Staining Solution (Ready-to-use)

150T

CS-01F96992

 

本品是無菌的即用型PI染色液（溶于PBS），可進入死細胞內與DNA結合，并被活細胞排斥在外，適合用于流式細胞儀進行細胞活力分析。PI單染用FL2通道檢測，若與FITC或PE標記抗體/蛋白聯合使用FL3通道檢測。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種常用的細胞核熒光染料，作為一種溴化乙錠（EB）的類似物，能夠嵌入堿基對之間實現與雙鏈DNA結合。PI經488 nm熒光激發，產生相對較大的斯托克司頻移后，并在617 nm處具有大發射波長。另外，PI不能穿透細胞膜而被排斥在活細胞外，但是可以穿過破損的細胞膜而對核染色。利用以上特性，PI可作為細胞活力分析的熒光探針之一。不僅可單獨使用；也可以同Calcein-AM、Hoechst 33258或Hoechst 33342等活細胞熒光探針一起使用，同時對活細胞和死細胞染色和鑒定。也能夠與488 nm激發的熒光素如FITC和PE等聯合使用。

使用方法

1）收集細胞，計數，高以1 x 106 cells/100 μl的量加入FACS分選管；

2）加2ml PBS（或HBSS）清洗細胞，300 x g離心5 min，去上清。重復一次。

注：若需要用抗體標記表面抗原，可在此步之后進行。PI不適合與檢測胞內分子的抗體聯合使用。

3）細胞清洗后，用100 μl流式細胞染色緩沖液（flow cytometry staining buffer）重懸細胞；加入10 μl PI染色液，輕柔混勻，冰上或者室溫避光孵育10-15 min。

4）直接上機進行流式分析。注：PI染色后不可再清洗細胞。PI染色孵育后盡快上機檢測。

注意事項

1）碘化丙啶（PI）是已知的誘變劑，操作過程中一定要做好防護工作避免與PI的直接接觸。另外PI溶液在丟棄之前需要先經過活性炭處理。

2）流式細胞染色緩沖液可配制如下：1×PBS (w/o Ca2+ and Mg2+) + 0.5-1% BSA（或 5% FBS）＋0.1% 疊氮鈉。也可根據實驗室自身體系調整。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
儲存條件：4℃，有效期半年
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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