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油性紅O（Oil Red O）是一種脂溶性偶氮染料，是很的脂溶劑和染脂劑，能特異性地使組織和細胞內(nèi)中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等染色。當(dāng)組織切片置入染液時，染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)（如脂滴）中，使組織內(nèi)的脂滴呈紅色。用于分析細胞樣品中脂質(zhì)狀況。油紅O染色法，由于其觀察性更好，染色更深，因此，目前已廣泛的替代了其他脂質(zhì)染色法，如蘇丹III、染色法等。

油性紅O染色試劑盒，主要用于病理狀態(tài)下組織脂肪的檢測。正常情況下，除脂肪細胞外其他細胞內(nèi)一般不見或僅見少量脂滴。在病理狀態(tài)下這些細胞中出現(xiàn)脂滴或脂滴明顯增多，特別是在心、肝、腎等實質(zhì)器官發(fā)生脂肪變性時，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡，這時需用脂肪染色鑒定該空泡是否為脂肪變性；此外，脂肪染色還有其他多種用途：1）在動脈粥樣硬化時，用脂肪染色可檢測內(nèi)皮細胞下的脂質(zhì)沉著；2）顯示脂肪栓塞栓子內(nèi)的脂質(zhì)，從而確診脂肪栓塞；3）用于腫瘤組織的鑒別診斷，由脂肪組織所發(fā)生的腫瘤在與其他組織來源的腫瘤相區(qū)分時，可以借助脂肪染色，脂肪組織所發(fā)生的腫瘤，脂肪染色為陽性。

注意事項

1）封片時不可用油溶性封固劑封片，即千萬不可用中性樹膠封片，只可用本產(chǎn)品所攜帶的水性封固劑封片，否則會影響脂類染色效果；

2）封片時片子不宜太干，否則易起氣泡，封片速度要快，防止凝固，發(fā)現(xiàn)有氣泡時不宜壓蓋玻片驅(qū)趕，這會使脂滴移位，若氣泡多，可用溫水浸掉蓋玻片后再封片。

3）乙醇、丙酮等脂溶劑均會影響對脂質(zhì)的保存，不宜用作封固劑；

4）水洗時水流不可太大；

5）染色液染色之前，樣本片盡量不要濕水；

6）切片時建議使用防脫載玻片，封片時建議使用免洗蓋玻片；

7）做油紅O染色時，冰凍切片要厚，一般為10-15μm，太薄的話脂肪會流失，可能造成假陰性結(jié)果；

8）配好的應(yīng)用液需用慢速濾紙過濾，防止染色時有雜質(zhì)；

9）油紅O染色時應(yīng)避免試劑揮發(fā)，否則易形成背景沉淀，樣本不同具體染色時間會有差異，根據(jù)自己的染色結(jié)果進行調(diào)整；

10）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
儲存條件：室溫，有效期12個月

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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