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預染瓊脂糖配膠液(100×,專用型)

  • 產(chǎn)品貨號:CS-01F96856
  • 產(chǎn)品價格:電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地:國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度:307
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:
  • 含量:100ml
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式:
  • 分子量:

簡介內(nèi)容:預染瓊脂糖配膠液(100×,專用型)現(xiàn)貨供應,價格實惠。

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標簽:預染瓊脂糖配膠液(100× 專用型) 100ml 

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產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

英文名稱

規(guī)格

貨號

預染瓊脂糖配膠液(100×,專用型)

Prestained Gel Buffer,100×, Special

100ml

CS-01F96856

本產(chǎn)品是本公司在百無憂電泳液基礎(chǔ)上開發(fā)的預染瓊脂糖配膠液,含抗水解的核酸染料,用于配制瓊脂糖凝膠(也可用于電泳,但不經(jīng)濟)。

產(chǎn)品特點:

1. 預染,含低毒穩(wěn)定的核酸染料,用戶不需要再購買EBSYBR green IGelGreen等染料。

2. 穩(wěn)定,可以常溫放置兩年,使用效果不衰減。染料不怕光、不怕水、不怕熱。

3. 性價比高,100mL的本產(chǎn)品可以配制至少100mini瓊脂糖膠。

4. 所配制的瓊脂糖凝膠跟百無憂電泳液和TBE 電泳液兼容,但跟TAE 電泳液不兼容。

5. 本產(chǎn)品配制的瓊脂糖凝膠尤其適用于長度在1500bp 以下的DNA片段的電泳,分離長于1500bpPCR片段時,如果條帶多,則不推薦使用本產(chǎn)品。

6. 用本產(chǎn)品配制的凝膠電泳得到的DNA片段的膠回收率高于TAE膠和TBE膠,不影響后續(xù)的DNA 膠回收和DNA 連接等反應。

保存條件:常溫保存和運輸,有效期兩年。若低溫放置有結(jié)晶(主要是染料在高鹽低溫條件下容易析出),請搖勻后使用,稀釋100 倍后染料晶體會自然溶解。

自備試劑:去離子水、瓊脂糖

使用方法:
將本產(chǎn)品用去離子水稀釋100 倍(1mL 本產(chǎn)品加99mL 去離子水,也可加100mL 去離子水),混勻后直接用于配制瓊脂糖膠,瓊脂糖膠的濃度根據(jù)要分離的DNA片段大小決定。由于本產(chǎn)品適用于分離1500bp 以下的DNA片段,因此瓊脂糖的濃度一般在1-2%。膠凝固后直接用于電泳,電泳液可以使用1×百無憂電泳液,也可以使用1×TBE 電泳液,按常規(guī)的電壓電泳即可。

實驗步驟:
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物完全分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司

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