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| 產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
| PAGE膠DNA純化回收試劑盒 | PAGE DNA Extraction Kit | 50次 | CS-01F96581 |
介紹
本試劑盒采用新型硅基質膜離心柱及特殊的緩沖液系統，可從聚丙烯酰胺凝膠中簡捷高效回收20bp～500bp的短片段DNA片段，回收效率可高達85%。并可大限度去除雜質，獲得高純度的DNA，所得到的DNA可直接用于酶切、連接、測序等后續的分子生物學試驗。
| 產品特點： 適用范圍廣泛，可以回收20bp～2kb的單鏈或者雙鏈DNA。 使用了優質結合液，不含傳統結合液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。 獨特的配方保證了該試劑盒比一般試劑盒回收效率大大提高。 快速、方便離心柱型，不需要使用有毒的、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 保存：RT，有效期12個月 注意事項： 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機。 結合液中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。 電泳時好使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。 切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。也可以選擇可見光染料染色后在可見光下切膠會避免紫外對DNA損傷。 回收率與片段大小、凝膠濃度、初始DNA量和洗脫體積有關。 操作步驟： 提示：次使用前請先在漂洗液WB中加入量無水乙醇，加入后請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入! 切取含DNA片段的PAGE凝膠（100mg左右，盡可能多地把多余的膠切除，否則會影響回收效率），放入1.5mL離心管中，用移液槍頭盡可能搗碎（好先在酒精燈上將槍頭的口燒密閉再用于搗碎），搗得越細越好。 向凝膠中加入1-2倍體積的Diffusion Buffer （如100mg凝膠加入100-200μL Diffusion Buffer），55℃溫浴30分鐘-2小時，期間每15分鐘渦旋震蕩混勻，促進膠中DNA擴散到溶液中。 一般來說，回收片段越大，DNA擴散需要的時間越長，100bp左右的DNA片段溫浴30分鐘就可以（時間長些也不影響回收效果）； 如果回收500bp-1000bp的DNA片段，可以將溫浴時間延長3-5個小時。也可以37℃溫浴12-16小時過夜。 12,000rpm離心5分鐘。小心取上清轉入新的離心管。記錄上清體積。 加入9倍上清體積的Binding Buffer，混勻。回收片段>100bp時，加5倍上清體積的Binding Buffer即可。 將上一步所得溶液加入吸附柱EC中（吸附柱放入收集管中），室溫放置1分鐘，12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。吸附柱大容積為750μL，若溶液體積大于750μL，可分批加入。 加入600μL漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。 重復步驟6一遍。 將吸附柱EC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。 取出吸附柱EC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加30-50μL洗脫緩沖液EB，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。如果需要較高濃度核酸，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心1分鐘。
洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要核酸濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但是小體積不應少于25μL，體積過小降低核酸洗脫效率，減少產量。 |
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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