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細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F96541
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：218
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：20次|50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒 20次 50次 

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細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒

Cells Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit

20次|50次

CS-01F96541

本試劑盒適用于快速提取凋亡DNA Ladder。細胞發生凋亡時，染色質DNA在核小體之間發生斷裂，終形成200bp整數倍的DNA片段，這些DNA片段被提取后，經電泳及溴化乙錠染色后形成梯子狀外觀，謂之DNA Ladder。血液和組織培養細胞在裂解/結合液中裂解后，釋放出來的DNA片段在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除，后低鹽的洗脫緩沖液將DNA Ladder片段從硅基質膜上洗脫。

試劑盒組份(50次)：

裂解/結合液CB————————15 ml

漂洗液WB——————————15 ml

洗脫緩沖液EB————————15 ml

吸附柱AC——————————50個

收集管(2ml)—————————50個

產品特點：

1.不需要使用有毒的等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

2.本公司獨特的裂解/結合液配方有效裂解細胞，使用本試劑盒不需要加入昂貴的蛋白酶K處理，大大降低了使用成本和加快了處理速度。

3.節省時間，簡捷，單個樣品操作一般可在10分鐘內完成。

注意事項

1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 開始實驗前將需要的水浴先預熱到70℃備用。

3. 裂解/結合液CB 含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. 一般2×106 培養細胞DNA 產量為10-20μg， 200μl 人全血典型產量為3-6μg。

5. 一般電泳檢測時典型上樣量為2-3μg 純化的DNA，如果凋亡率低，有可能只見到基因組DNA，而見不到DNA ladder，可以試試加大上樣量。

儲存條件：室溫，有效期12個月。

 

本制品別名：凋亡DNA Ladder快速提取試劑盒
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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