產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
唾液DNA收集提取試劑盒	Saliva DNA collection, preservation，transport and extraction Kit	10次\|50次	CS-01F96537

本試劑盒針對(duì)唾液樣本中的DNA 進(jìn)行收集、保存、運(yùn)輸、純化。可提供無(wú)疼痛、非侵入性的方法，患者不用忍受抽血的疼痛和感染的風(fēng)險(xiǎn)就能獲得高質(zhì)量、高數(shù)量的樣品，受測(cè)者排斥性低，嬰兒和老人都能方便取得DNA樣本。收集過(guò)程十分簡(jiǎn)單，受測(cè)者將唾液吐至保存液內(nèi)混勻就完成收集過(guò)程。混勻后常溫下可運(yùn)輸保存長(zhǎng)達(dá)一年不會(huì)變質(zhì)。能夠節(jié)省運(yùn)送、保存冷藏設(shè)備和電力費(fèi)用。收集的唾液通過(guò)幾個(gè)簡(jiǎn)單步驟便可提取DNA。抽取的DNA產(chǎn)量高達(dá)110μg/2mL唾液。

試劑盒組份(50次)：

保存液———————————2ml×50

細(xì)胞裂解液—————————50ml

雜質(zhì)沉淀液—————————85ml

DNA溶解液——————————20ml

5ml采集管——————————50個(gè)

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.非侵入性采檢方式免除了抽血的疼痛和降低了污染風(fēng)險(xiǎn)，并增加了取檢的便利性，可由受檢者自行取樣。

2.僅需2ml的唾液樣本，即可取得約110μg的DNA(不同個(gè)體產(chǎn)量差異很大)。

3.采樣后的檢體可穩(wěn)定地儲(chǔ)存于室溫環(huán)境一年以上。

唾液樣品收集步驟：

1. 用清水漱口1～2 次，然后吐掉。

2. 漱口后等候至少5 分鐘方可采集唾液，期間不要進(jìn)食、飲用各種飲料。

3. 將唾液(不是喉嚨中痰液)吐到5ml 采集管中，直至2ml 刻度位置。(不可將痰液吐到收集管中，若唾液不足，可做口舌運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)分泌。浮在唾液上層的少量泡沫不包括計(jì)算在2ml 唾液采集量?jī)?nèi)，采集過(guò)程必須在30 分鐘內(nèi)完成)

4. 將等體積2ml 保存液全部倒在5ml 唾液采集管中，充分顛倒混勻后旋緊蓋子。

唾液DNA提取步驟(2ml唾液量舉例，可按比例放大縮小每次提取的唾液量)：

1. 將保存液/唾液混合物放置于50℃ 水浴中至少1 小時(shí)或50℃ 空氣孵箱至少2 小時(shí)。

2. 轉(zhuǎn)移4ml 混合物(2 ml 唾液加2 ml 保存液)到一個(gè)15 ml 或者50 ml 的離心管。

3. 加入1ml 裂解液和10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高速渦旋振蕩10 秒后室溫放置10分鐘。

4. 加入1. 7 ml 雜質(zhì)沉淀液到上述裂解混合物中。

5. 高速渦旋振蕩25 秒，充分混勻雜質(zhì)沉淀液和裂解混合物。

6. 2500g離心5分鐘。沉淀的雜質(zhì)和蛋白會(huì)在管底形成一個(gè)致密的沉淀團(tuán)。如果蛋白沉淀不太致密，可以冰上放置5分鐘，然后重復(fù)步驟6。

7. 仔細(xì)轉(zhuǎn)移上清(含有DNA)到一個(gè)新的15 ml 或者50 ml 的離心管。注意不要觸動(dòng)管底沉淀。加入5ml 異丙醇。(唾液DNA 含量較低時(shí)，加入40μl Glycogen 20mg/ml可能提高一些產(chǎn)量)

8. 輕柔顛倒混勻50 次。

9. 2000g 離心3 分鐘，此時(shí)一般可在管底看到白色的DNA 沉淀。

10. 倒棄上清，倒置后在吸水紙上輕敲幾下以盡可能吸干。加入5ml 70％乙醇，顛倒幾次漂洗DNA 沉淀。

11. 2000g 離心1 分鐘, 仔細(xì)倒去上清(沉淀很松，注意不要把DNA 沉淀倒掉了)。

12. 倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘(不要干過(guò)頭，也不要?dú)埩粢掖?/span>)。

13. 加入250μl -400μl DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀，輕彈管壁混勻。

14. 可以放置在65℃溫育30-60 分鐘(不要過(guò)一小時(shí))，然后在室溫或者4℃放置過(guò)夜來(lái)重新水化DNA，中間不時(shí)的輕彈管壁幫助重新水化DNA。

15. DNA 可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在-20℃ 或者-80℃。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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