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產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號(hào)
核酸釋放劑(用于DNA)	Nucleic Acid Releaser	10mL	CS-01F96531

本產(chǎn)品專用于從各種常見的生物樣品中快速提取用于核酸擴(kuò)增的DNA樣品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1．單溶液，操作簡單，只用一步（約5-10分鐘）即可以得到用于核酸擴(kuò)增的模板，不需要任何離心、抽提等操作步驟，比常用的Chelex100提取方法和/氯仿方法快。

2．可用于DNA模板。

3．跟各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)兼容，包括PCR、LAMP等。

4．兼容性廣，可以用于幾乎所有的分子生物學(xué)樣品，包括細(xì)菌、昆蟲、真菌、各種植物、各種動(dòng)物、法醫(yī)樣品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發(fā)、組織樣品、口腔細(xì)胞和FTA卡）、石蠟組織切片等。

5．環(huán)保健康，不使用任何有毒有害的試劑。

6．本產(chǎn)品只能用于科研，尤其適用于大規(guī)模育種篩選，不能用于臨床。

7．本規(guī)格足夠200次核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)

保存條件：常溫，有效期一年。

使用方法：

1．將約2μL液體樣品（如全血、細(xì)胞培養(yǎng)液、病毒樣品、糞便樣品）或2mg（約半粒芝麻大小）的固體樣品（如動(dòng)物組織、植物葉片、種子等）加入到50μL本產(chǎn)品中。

注意：樣品加入量可能需要根據(jù)其DNA的含量稍做調(diào)節(jié)，如果樣品DNA含量少，則用量要增加，但總液體樣品用量好不要過本產(chǎn)品用量的1/10；固體樣品用量好不要過1mg/10μL的比例。

2．對(duì)液體樣品，室溫放置3分鐘；對(duì)固定樣品80℃加熱5分鐘；對(duì)難以破裂的樣品（如有厚壁的真菌、石蠟組織切片、血斑），則保溫時(shí)間可以延長到10-30分鐘。

3．簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增或其他擴(kuò)增（裂解物體積好不要過反應(yīng)體積的2/5，對(duì)50μL體系的擴(kuò)增，加入的裂解液好不要過20μL。由于各擴(kuò)增體系成分不同，跟本產(chǎn)品組合時(shí)好做梯度測(cè)試，即在50μL的擴(kuò)增反應(yīng)中分別加5μL、10μL、15μL、20μL、25μL樣品裂解液進(jìn)行測(cè)試）。

4．其余同常規(guī)操作。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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