13585831301
021-59541103 021-60443211
3004967995
13585831301021-59541103 021-604432113004967995
在線訂購 免費訂購熱線：021-59541103 021-60443211
聯系人:高小姐
電話:021-59541103 021-60443211
手機:13585831301
Q Q： 3004967995
Email:3004967995@qq.com
詳細地址：上海嘉定區嘉羅公路1661
產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
| 無內毒素質粒中提試劑盒（5～15mL） | Endo-Free Plasmid Midi Kit（5～15mL） | 50次 | CS-01F96519 |
本試劑盒通過堿裂解法裂解細胞，新型硅基質膜高效專一的結合質粒DNA，同時采用特殊的緩沖液系統和除內毒素過濾柱，有效去除內毒素、蛋白等雜質。由本試劑盒所得質粒純度高、質量穩定，特別適用于細胞轉染，同時也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化等下游實驗。
| 內毒素是質粒提取中常見的污染物，由于真核細胞對內毒素非常敏感，因此，如果質粒中含有內毒素會大大降低真核細胞轉染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內毒素質粒的新方法，提取的質粒大限度去除內毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。 保存：室溫(15～30℃) 自備試劑：無水乙醇、異丙醇。 實驗前準備及重要注意事項： 所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環境穩定保存1年，更長時間保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可穩定保存6個月。 次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2～8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復至室溫后使用。 次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。 使用前請先檢查Buffer P2和Buffer E3是否出現結晶或沉淀，如有結晶或沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。 注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應立即蓋緊蓋子。 提取質粒的量和純度與細菌培養濃度、菌株種類、質粒大小、質粒拷貝數等因素有關。 操作步驟： 取5～15mL過夜培養的菌液，加入離心管(自備)中，13000rpm(~16200×g)離心1分鐘收集細菌，盡量吸棄全部上清。 向留有菌體沉淀的離心管中加入500μL Buffer P1(請先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮細菌沉淀。 注意：如果菌塊未徹底混勻，將會影響裂解效果，使提取量和純度偏低。 向離心管中加入500μL Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻8～10次，使菌體充分裂解，室溫放置3～5分鐘。此時溶液應變得清亮粘稠。 注意：溫和混勻，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA，造成提取的質粒中混有基因組DNA片段。如果溶液未變得清亮，提示可能菌量過大，裂解不徹底，應減少菌體量。 向離心管中加入500μL Buffer E3，立即上下顛倒混勻8～10次，此時出現白色絮狀沉淀，室溫放置5分鐘。13000rpm離心5分鐘，吸取上清，將上清加入過濾柱FM中(已裝入收集管)，13000rpm離心1分鐘過濾，將收集管中的濾液轉移到離心管(自備)中。 注意： ① Buffer E3加入后應立即混勻，避免產生局部沉淀。 ② 吸附柱的大容積為750μL，所以上清液請分兩次過濾，并混合于同一自備離心管中。 向濾液中加入450μL異丙醇，上下顛倒混勻。 柱平衡：向已裝入收集管的吸附柱中加入200μL Buffer PS，13000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 將步驟5中濾液與異丙醇的混合溶液轉移到平衡好的吸附柱(已裝入收集管)中。 13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：吸附柱的大容積為750μL，所以第5步中所得溶液分多次過柱。 向吸附柱中加入750μL Buffer PW(請先檢查是否已加入無水乙醇)，13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。 將吸附柱重新放回收集管中，13000rpm離心1分鐘。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。 將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中，向吸附膜的中間部位加入100～200μL Endo-Free Buffer EB，室溫放置2～5分鐘，13000rpm離心2分鐘。-20℃保存質粒。 注意： ① 為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2～5分鐘，13000rpm離心2分鐘。Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預熱，適當延長吸附和洗脫的時間，可以增加提取效率。
② 質粒拷貝數較低或>10kb時，Endo-Free Buffer EB在65～70℃水浴預熱，可以增加提取效率。 |
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
留言注意事項：
1.遵守中華人民共和國有關法律、法規，尊重網上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。
2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經本站同意，任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。
| 您感興趣的產品* | |
| 您的單位* | |
| 聯系人* | |
| 聯系電話* | |
| 詳細地址* | |
| 常用郵箱* | |
| 請輸入您對我們的意見或建議* | |
| 驗證碼* | |
 |
產品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。
3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。
6、代測免收代測費，一周出結果。
7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。
8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。
普票匯款信息
賬 戶 名：上海生物
開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部
賬 號：2169 2341 6278
關于莼試
產品訂購
新手指南
幫助中心