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一管式病毒DNA-RNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F96507
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：259
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：一管式病毒DNA-RNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:一管式病毒DNA-RNA提取試劑盒 50次 

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一管式病毒DNA-RNA提取試劑盒

One-tube virus RNA-DNA extraction kit

50次

CS-01F96507

本試劑盒是整合一管式病毒和一管式病毒RNA提取試劑盒兩產品而得，專門用于從血清(血漿)等液體樣品中同時提取病毒DNA(如HBV DNA)和病毒RNA(如HCV RNA和HIV RNA)的產品。本產品靈敏度高，穩定性好，使用簡單快捷，尤其適合于整合到臨床PCR或RT-PCR 檢測試劑盒中。

試劑盒特點：

1. 回收率高，可以達到90%以上，高于絕大部分基于離心柱的提取方法？梢愿QIAGEN的同類產品媲美。

2. 靈敏度高，通過PCR 檢測到病毒DNA的終靈敏度可以達到30 拷貝/mL樣品，通過RT-PCR 檢測到病毒RNA的終靈敏度可以達到50 拷貝/mL樣品。

3.一管式操作，減少了樣品污染的可能。

4.一站式套裝，除樣品外客戶不需要準備任何試劑，降低了實驗誤差。

5. 安全無毒，不需要使用和氯仿等有機溶液。

6.處理量大，如果加上病毒離心富集步驟，多可以處理1.5mL液體病毒樣品。

7.與PCR、熒光PCR、RT-PCR、熒光RT-PCR等后續反應兼容。

儲存條件：常溫運輸，溶液A4℃保存，溶液B和溶液C室溫保存，有效期一年。溶液B和溶液C具有揮發性，使用后需要將瓶蓋擰緊。

使用方法：

1. 將0.1-0.2mL液體樣品轉移到1.5mL 旋蓋離心管中。如果需要富集樣品中的病毒，可以先將1.5mL液體樣品轉移到1.5mL 旋蓋離心管中,然后4℃ 24,000 g離心60分鐘，移棄1.3mL上清液后繼續操作下一步的操作。

2. 加入0.6mL溶液A，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。

 注意:溶液A用前需37℃-65℃水浴融化并充分搖勻后方可使用。

3.室溫靜置10分鐘。

4. 加入0.6mL溶液B，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。

5. 15000g室溫離心15分鐘。烈建議在離心管管壁上用記號筆做簡單標記以區別離心面和向心面。

6.小心移棄上清。注意不要觸及管底的DNA和RNA沉淀。

7. 加入1.0mL溶液C，振蕩數秒后15000g室溫離心5分鐘。注意：將離心管放入離心機時一定要離心面向外。

8. 移棄上清，注意不要觸及管底的DNA和RNA沉淀。

9. 短暫離心數秒，注意：將離心管放入離心機時一定要離心面向外。

10.小心移棄殘留上清(殘留的溶液C會影響后續反應)。此時離心面的管壁上將有可見的膜狀沉淀。

11. 加入100-200μl溶液D，用移液槍仔細吹打離心管管底和管壁的膜狀沉淀，使其溶解。溶解液混濁或有少量不溶物是正，F象。不要離心只取上清使用，因為不溶沉淀物中含有DNA和RNA，必須取混合液使用(哪怕很渾濁)。

 

12. 直接取適量樣品用于PCR或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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