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產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 柱式質粒DNA大提試劑盒(100～300mL) | Column Max Plasmid DNA Extraction Kit(100-300mL) | 5次 | CS-01F96506 |
本試劑盒是用于質粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專一結合DNA，后洗去雜質，高效快速提取質粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內完成。使用本試劑盒純化得到的高純度質粒DNA，可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR等。
| 試劑盒特點： 快速、步驟少，整個操作在半個小時之內完成。 純度高，采用本試劑盒提取的質粒OD比值在1.8～2.0之間。 產量高，每毫升過夜培養(yǎng)的細菌可以提取到2～5μg/mL。 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質粒。 注意事項： 細菌培養(yǎng)時間一般為12～16小時，但接種量大時應減少時間。過度培養(yǎng)會降低質粒的質量甚至導致質粒DNA突變。 溶液A:溶液B:溶液C的比例為3:3:4。若細菌量增大，需按此比例放大這些溶液的使用量。 隨菌體增多應延長溶液B的作用時間，直至溶液成粘稠透明狀。但時間過長會導致質粒DNA變性。 加溶液C后形成的白色沉淀中有變性的蛋白質、細菌基因組DNA和細胞碎片，離心后應避免帶入到后續(xù)處理中。 通用洗柱液洗滌離心柱后必須甩干一次，否則殘留通用洗柱液中的乙醇會干擾后續(xù)實驗。 質粒的具體產量跟細菌量、質?？截悢?、質粒大小和操作規(guī)范程度密切相關。100mL高拷貝的菌液一般能得到700～1500μg質粒DNA，100mL低拷貝的菌液一般能得到150～350μg質粒DNA。 純化的質粒在電泳中表現為2～3條帶有時甚至為4～6條帶均屬正常，未分開的環(huán)套質粒，易被誤判為基因組DNA。 使用方法： 用250mL離心管收集100～300mL菌液，5000rpm離心10分鐘，去除上清。 往細菌沉淀中加入5mL溶液A，充分振蕩懸浮（次使用時需要將RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均勻，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存）。 注意：充分重懸細胞沉淀使之無細胞結塊狀物對于獲得高的質粒產量十分重要。 加入5mL溶液B，溫和翻轉10余次至藍色變得均勻。室溫放置5～10分鐘裂解細菌。 注意：避免劇烈振蕩，否則細菌基因組DNA將斷裂為小片段，與質粒難以分離，污染質粒DNA。溶液B用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的堿，降低其效率。如果溶液B顏色不是藍色，則表示變質，應該棄之不用并且速跟廠家聯系。 加入冰浴的7mL溶液C，顛倒混勻，此時混合液應該從藍色變成無色，如果不發(fā)生顏色變化，則表示溶液C變質，需要聯系廠家。將混合液冰上放置10分鐘，將有白色絮狀物形成。注意不要過分振蕩。 6000rpm離心10分鐘。如果離心管承受能力，離心速度還可以適當提高以充分沉淀絮狀物。 將上清液（約20mL）轉移到離心吸附柱中，放入50mL套管中。由于此時的溶液比重較大，部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常，吸取上清時避開漂浮的沉淀物即可。 6000rpm離心5分鐘，質粒DNA將與離心吸附柱中的膜結合。棄穿透液。 將10mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。 重復上步一次，即將10mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，棄穿透液。 室溫6000rpm空甩5分鐘，棄穿透液。注意：此步對去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會影響DNA的使用。 將離心吸附柱放入一個自備的、干凈的50mL塑料離心管中，加0.5mL DNA洗脫液2.0（洗脫液如加熱到50～65℃效果更佳），室溫靜置2分鐘后6000rpm離心5分鐘，收集液即是質粒DNA溶液。
本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較，所以再用1mL DNA洗脫液2.0洗脫3～4次才能把絕大部分質粒DNA洗脫下來。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。 |
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司
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