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產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
| 無內毒素質粒DNA小提試劑盒(1.5～5mL) | Endotoxin-free Plasmid Mini Kit(1.5-5mL) | 50次 | CS-01F96504 |
本試劑盒采用菌體內毒素清除劑，在質粒提取前就把細胞壁上的內毒素清除掉，徹底避免了目前通用的先提取DNA+內毒素混合物，再從中純化質粒DNA的弊端。用本試劑盒提取的質粒DNA，內毒素的污染濃度低，適合于轉染等對內毒素的污染敏感的實驗。
| 試劑盒特點： 操作簡單，只在經典的柱式質粒DNA提取前，增加菌體內毒素清除一步。 去內毒素效果好，處理一次可以去除99%以上的內毒素。 質粒丟失少，產率只比柱式質粒低5～10%，效果好于先提質粒DNA，再用液相內毒素清除劑處理的方法。 DNA可以直接用于轉染等實驗。 儲存條件： 常溫運輸及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低溫運輸和保存。 使用方法： 一、用菌體內毒素清除劑清除E.coli細胞壁上的內毒素。 收集1.5～5mL E.coli飽和菌液，12000rpm離心1分鐘，棄上清，得到細菌沉淀。 加入1mL菌體內毒素清除劑溫和混勻后10000～12000rpm離心1分鐘，棄上清（含內毒素）。 一次洗滌（1～2步）可以去掉90%以上的內毒素，如果需要，可以再重復上述洗滌操作步驟3次，得到的菌體可以直接進入后續的質粒DNA提取步驟。 二、從無內毒素的E.coli中提取質粒DNA 先將全部RNase A溶液全部加入到柱式質粒溶液A中，搖勻后再取用，未用完的柱式質粒溶液A好在4℃保存。 在第3步所得菌液中加入250μL柱式質粒溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸（此步在冰上操作效果更佳）。 注意：細胞未充分懸浮會影響后續操作，可以使用漩渦振蕩器幫助混勻或使用Tip吸頭吹打沉淀至完全混勻。 加入250μL柱式質粒溶液B（如果溶液B有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復顛倒混勻4～6次，看到溶液變粘即可，然后冰上放置不過4～5分鐘。 注意：此步處理不能過5分鐘，否則DNA的堿損傷比較嚴重。同時千萬不要劇烈振蕩，否則基因組DNA斷裂產生的片段非常容易污染質粒DNA。溶液B用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。 加入350μL冰上預冷的柱式質粒溶液C，反復顛倒混勻4～6次，可見白色沉淀物產生，然后冰上放置至少5分鐘。 高轉速（12000rpm以上）4℃離心5分鐘，小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大，有時候出現沉淀漂浮是正常現象，取上清時避開漂浮的沉淀即可。如果此步的離心在室溫進行，更容易出現沉淀物漂浮的現象。 靜置2分鐘以讓質粒DNA與吸附柱充分結合，此步十分重要。 室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中的廢液。 加入500μL的通用洗柱液，室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中廢液。 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會揮發。 重復上步1次。 室溫12000rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用（如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中）。 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管（自備）中，加入30～100μL 65～80℃預熱的DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液2.0也可以用于洗脫，但產量稍微有所降低。 室溫12000rpm離心1分鐘，離心管底溶液即質粒DNA。
注：由于的吸附柱結合DNA能力較，如果再加適量DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質粒DNA（相當于次洗脫的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來洗脫。 |
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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