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詳細地址：上海嘉定區嘉羅公路1661
產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
| 柱式質粒DNA小提試劑盒(1～4mL) | Plasmid DNA Mini Kit(1-4mL) | 100次 | CS-01F96503 |
本試劑盒是用于質粒DNA小量制備與純化的試劑盒。本產品基于改良后的堿變性法，先菌體經堿裂解法處理使基因組DNA和質粒DNA均變性，再用酸中和，質粒DNA客戶快速復性，而基因組DNA不能快速復性，故可以通過離心去除，除去后含質粒的上清用離心吸附柱吸附質粒DNA，洗去雜質，即可得到純化的質粒DNA。
| 試劑盒特點： 快速、步驟少，整個操作在30分鐘左右完成。 不需要預平衡離心吸附柱。 通用洗柱液即開即用，不需要用戶額外加乙醇。 溶液B中有藍色染料，便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況，保證實驗效果。 產量高，一次可以處理1～4mL過夜培養的菌液，每毫升過夜培養的細菌可以提取到2～5μg/mL（取決于質粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝）。 純度高，采用本試劑盒提取的質粒OD比值在1.8～2.0之間，可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR等。 運輸及保存： 常溫運輸和保存，RNase A溶液需要-20℃保存，有效期一年。 使用方法： 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養基中，37℃震蕩培養12～16小時（搖床轉速200-300）。注意：建議使用LB培養基，營養更豐富的培養基會使菌體濃度過高，過純化系統處理能力而降低DNA質量。另外，延長培養時間會因細胞死亡、裂解而造成質粒DNA濃度降低。 用1.5mL離心管收集1～4mL過夜培養飽和菌液，室溫12000rpm離心1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。 次使用本試劑盒時，先將全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，搖勻后再取用，未用完的溶液A放4℃保存。 加入250μL溶液A，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細胞未充分懸浮會影響后續堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完全混勻。 加入250μL溶液B（如果溶液B在低溫放置產生沉淀，須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復顛倒混勻看到溶液的藍色變得均勻并且溶液變粘即可（一般需要顛倒4～6次），然后冰上放置不過5分鐘。注意：冰上放置不要過5分鐘，否則質粒DNA會有堿損傷。千萬不要劇烈振蕩，否則基因組DNA斷裂產生的片段非常容易污染質粒DNA。 溶液B用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的堿，降低其效率。如果溶液B顏色不是藍色，則表示變質，應該棄之不用并且速跟廠家聯系。 加入350μL冰上預冷的溶液C，溫和反復顛倒直到溶液顏色變成無色（一般需要顛倒混勻4～6次）；靹蚝罂梢姲咨恋砦锂a生，然后冰上放置至少5分鐘讓質粒DNA復性。 12000rpm離心3分鐘，小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大，部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常，吸取上清時避開漂浮的沉淀物即可。如果此步的離心在4℃進行，可減輕沉淀物漂浮。 靜置2分鐘以讓質粒DNA與離心吸附柱充分結合，保證靜置不少于2分鐘十分重要。 室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中的廢液。 加入500μL的通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會揮發。 重復上步1次。 室溫12000rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用（如殘留乙醇使DNA溶液在電泳上樣時不能沉淀到加樣孔中）。 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管（自備）中，加入30～100μL 65～80℃預熱的DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液2.0也可以用于洗脫，但產量稍微有所降低。 室溫12000rpm離心1分鐘，離心管底溶液即質粒DNA。
由于我公司的吸附柱結合DNA能力較，如果再加適量DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質粒DNA（相當于次洗脫的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來洗脫。 |
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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