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產品屬性:
產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
柱式質粒DNA小提試劑盒(1~4mL) | Plasmid DNA Mini Kit(1-4mL) | 100次 | CS-01F96503 |
本試劑盒是用于質粒DNA小量制備與純化的試劑盒。本產品基于改良后的堿變性法,先菌體經堿裂解法處理使基因組DNA和質粒DNA均變性,再用酸中和,質粒DNA客戶快速復性,而基因組DNA不能快速復性,故可以通過離心去除,除去后含質粒的上清用離心吸附柱吸附質粒DNA,洗去雜質,即可得到純化的質粒DNA。
試劑盒特點: 快速、步驟少,整個操作在30分鐘左右完成。 不需要預平衡離心吸附柱。 通用洗柱液即開即用,不需要用戶額外加乙醇。 溶液B中有藍色染料,便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況,保證實驗效果。 產量高,一次可以處理1~4mL過夜培養的菌液,每毫升過夜培養的細菌可以提取到2~5μg/mL(取決于質粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝)。 純度高,采用本試劑盒提取的質粒OD比值在1.8~2.0之間,可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR等。 運輸及保存: 常溫運輸和保存,RNase A溶液需要-20℃保存,有效期一年。 使用方法: 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養基中,37℃震蕩培養12~16小時(搖床轉速200-300)。注意:建議使用LB培養基,營養更豐富的培養基會使菌體濃度過高,過純化系統處理能力而降低DNA質量。另外,延長培養時間會因細胞死亡、裂解而造成質粒DNA濃度降低。 用1.5mL離心管收集1~4mL過夜培養飽和菌液,室溫12000rpm離心1分鐘,棄上清,再短暫離心,吸棄殘留液體。 次使用本試劑盒時,先將全部RNase A溶液全部加入到溶液A中,搖勻后再取用,未用完的溶液A放4℃保存。 加入250μL溶液A,用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意:細胞未充分懸浮會影響后續堿變性,可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完全混勻。 加入250μL溶液B(如果溶液B在低溫放置產生沉淀,須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻看到溶液的藍色變得均勻并且溶液變粘即可(一般需要顛倒4~6次),然后冰上放置不過5分鐘。注意:冰上放置不要過5分鐘,否則質粒DNA會有堿損傷。千萬不要劇烈振蕩,否則基因組DNA斷裂產生的片段非常容易污染質粒DNA。 溶液B用后需要將蓋擰緊存放,否則空氣中的二氧化碳會進入溶液,形成碳酸,中和溶液B中的堿,降低其效率。如果溶液B顏色不是藍色,則表示變質,應該棄之不用并且速跟廠家聯系。 加入350μL冰上預冷的溶液C,溫和反復顛倒直到溶液顏色變成無色(一般需要顛倒混勻4~6次)?;靹蚝罂梢姲咨恋砦锂a生,然后冰上放置至少5分鐘讓質粒DNA復性。 12000rpm離心3分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常,吸取上清時避開漂浮的沉淀物即可。如果此步的離心在4℃進行,可減輕沉淀物漂浮。 靜置2分鐘以讓質粒DNA與離心吸附柱充分結合,保證靜置不少于2分鐘十分重要。 室溫12000rpm離心1分鐘,棄收集管中的廢液。 加入500μL的通用洗柱液到離心吸附柱中,室溫12000rpm離心1分鐘,棄收集管中廢液。注意:通用洗柱液中含乙醇,每次用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。 重復上步1次。 室溫12000rpm離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如殘留乙醇使DNA溶液在電泳上樣時不能沉淀到加樣孔中)。 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管(自備)中,加入30~100μL 65~80℃預熱的DNA洗脫液2.0,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液2.0也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。 室溫12000rpm離心1分鐘,離心管底溶液即質粒DNA。
由于我公司的吸附柱結合DNA能力較,如果再加適量DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多質粒DNA(相當于次洗脫的20~30%),但注意不要使用上步得到的DNA洗脫液2.0來洗脫。 |
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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