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柱式動物小RNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F96472
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：238
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式動物小RNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式動物小RNA提取試劑盒 50次 

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柱式動物小RNA提取試劑盒

RNasy Small RNA Isolation Kit with Spin Column

50次

CS-01F96472

本試劑盒是一種基于離心柱法從動物組織或培養的動物細胞中安全、快速、便捷、穩定、高效、高質量地抽提miRNA等小于200個核苷酸(nucleotide,nt)的小RNA(small RNA)的試劑盒。

本試劑盒抽提得到的小RNA可用于反轉錄、RT-PCR、qPCR、Northern等常規實驗，也可以用于基因芯片分析、高通量測序等對小RNA質量要求較高的情況。

試劑盒特點：

本試劑盒使用安全。

本試劑盒通過特殊的柱純化介質進行小RNA分離純化，不僅能有效避免傳統的Trizol法抽提時使用的酚、氯仿等有毒有害有機試劑，也能有效避免如國外的Q品牌等公司使用類似于Trizol的裂解液裂解樣品、接著使用氯仿分層、后續再進行柱純化等涉及的有毒有害有機試劑。

本試劑盒使用快速、便捷。

本試劑盒采用柱純化，無需繁瑣的RNA沉淀步驟，抽提操作過程僅20-25分鐘。相比于傳統的Trizol抽提法，本試劑盒能夠有效去除大分子RNA，操作流程顯著簡化，縮短了抽提時間，降低了RNA降解的風險。和國外同類柱純化產品相比，所需操作步驟和操作時間基本一致。

本試劑盒抽提獲得的小分子量RNA得率高、純度好。

100萬培養動物細胞約能抽提得到1-2μg小RNA，5mg小鼠組織約能抽提得到1-1.5μg小RNA。A260/A280通常為2.0-2.2。

保存條件：室溫保存，一年有效。

注意事項：

對于富含RNase的樣品(如動物組織)，建議使用前在裂解液中添加二硫蘇糖醇(Dithiothreitol,DTT)至終濃度為40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巰基乙醇至終濃度為1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巰基乙醇)，含DTT或β-巰基乙醇的裂解液可在室溫放置1個月。

本試劑盒提供的所有試劑和耗材都是RNase-free，操作時應小心，避免被污染。所有自行準備的試劑和耗材也都應是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后高溫高壓滅菌并烘干。操作時應避免對著樣品或所使用的試劑盒耗材呼氣或說話，以防RNase污染。建議戴一次性口罩操作。

對于操作環境中RNA酶的去除，推薦使用我公司的核酸酶清除劑(YT400)以去除實驗桌面上或其它接觸面上的RNase。

使用凍存的細胞或組織抽提小RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內的RNase會被釋放出來并剪切樣品中的RNA。對于組織樣品，推薦使用我公司的動物組織RNA穩定保存液進行保存以保證樣品RNA的完整性。

本試劑盒所有操作均在室溫進行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行。

廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。

結合液I、結合液II和洗滌液中含有乙醇，使用后須旋緊瓶蓋以防揮發，并須按照易燃試劑的相關規范進行存放和使用。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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