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總RNA強效提取試劑

  • 產品貨號：CS-01F96455
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：242
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：100ml
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：總RNA強效提取試劑現貨供應，價格實惠。

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標簽:總RNA強效提取試劑 100ml 

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總RNA強效提取試劑

Total RNA Extraction Reagent

100ml

CS-01F96455

本制品具有裂解能力更，靈敏度更高等特點。可用于從細胞和組織中提取出總RNA，在樣品裂解或勻漿過程中，本制品可保持RNA完整性，同時裂解細胞，溶解細胞內含物。

本制品既適用于小量樣品（50-100mg組織、5×106細胞）的總RNA提取，也可用于大量樣品（≥ 1g組織或≥107細胞）的總RNA提取。對人、動物、植物組織提取都適用，同時可處理病毒樣本、血清、體液等液體材料。1h內即可完成反應，提取的總RNA沒有DNA和蛋白的污染，可用于RT-PCR、Northern blot和分子克隆等下游實驗。

產品特點：

·改良的裂解液配方，特別適用于低含量樣本、液體材料和病毒材料。

·裂解能力更，提取靈敏度更高。

·適應材料廣泛。

儲存條件：2-8℃避光保存12個月。

自備試劑：氯仿、異丙醇、RNase-free ddH2O、75%乙醇（用RNase-free ddH2O配制）。

預防RNase污染，應注意以下幾方面：

1．經常更換新手套。因為皮膚經常帶有細菌，可能導致RNase污染。

2．使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

3．RNA在裂解液RL中時不會被RNase降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。

4．配制溶液應使用無RNase的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.1%（V/V)，放置過夜，高壓滅菌。）

使用前注意事項：

1．勻漿后，加氯仿前，樣品可在-70℃放置一個月。

2．RNA沉淀可以保存在75%乙醇中，2-8℃一個星期以上或-20℃一年。

3．若提取細菌RNA，推薦應用培養(yǎng)細胞/細菌總RNA提取試劑盒
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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