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RNA樣品高效保存液

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  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：100ml
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：RNA樣品高效保存液現貨供應，價格實惠。

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標簽:RNA樣品高效保存液 100ml 

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RNA樣品高效保存液

RNA sample efficient preservation solution

100ml

CS-01F96419

本試劑是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液，能使細胞內的RNA與RNA酶分離，可以快速可靠地保存動物組織、細胞內的RNA。組織獲取后立即浸入保存液中，在室溫可以保存7天，4℃可以保存4周，-20℃、-80℃標本可以長期保存，RNA穩定存在不降解，取出后用各類方法抽提可以獲得高質量的RNA。。

操作步驟：

1、根據要保存的各樣本的體積，計算出所需保存液用量。保存液的用量應當是組織體積的10倍(100mg組織約用1ml保存液)；離心收集2×107細胞保存液的用量是1ml。加入保存液的原則是：量寧多勿少。

建議在實際操作中不要稱量組織，而直接根據目測結果加入保存液量，以加快操作和減少污染。例如5mm邊長的立方體組織塊，體積為125mm3=125μl，故應當加入1.25ml的保存液液。

2、將保存液按需要量分裝入自備保存管中；

3、快速將較大的組織切成厚度<0.5 cm的任意片狀，較小的組織直接取下，立即完全浸入保存液中。

注：組織的厚度一定要<0.5 cm。組織過厚則保存液不能有效滲入，組織中間部位的RNA不能受到保護。較大的組織可以切成厚度<0.5 cm的任意片狀后保存，較小的組織(如大鼠的腎臟、脾臟，小鼠的大部分器官)則可以直接浸入保存液。

4、保存時先將樣本浸入保存液后置4℃冰箱過夜(注：4℃過夜是必需的，這樣可使保存液完全滲入到組織中)，然后轉移到-20℃冰箱(保存液在-20℃時可能為液態，也可能為固態，如有結晶析出，也是正常情況)；或者在4℃冰箱過夜后，直接轉移到-80℃冰箱。在保存液中保存的標本，反復凍融至室溫20次不影響RNA的質量。

注意事項：

1、組織和細胞取材速度要快，在獲取后應當盡快浸入保存液，以防止RNA降解。

2、冰凍組織不能用保存液保存，因為保存液不能有效滲入冰凍組織。

3、保存樣品的RNA提取：樣本從-20℃或-80℃冰箱取出后，復溫到室溫后，取出組織塊，再用于提取RNA。細胞樣本則復溫后低速離心收集細胞，去除保存液，再用于提取RNA。后繼的處理(如組織勻漿)可以在室溫下進行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保護。殘留少量保存液保存液不影響后繼提取RNA的質量。

4、保存液在動物組織(如大鼠，脾臟)和細胞(如DH5α)RNA的保護中效果不錯；植物材料種類繁多，沒能一一測試(煙草和擬南芥葉片中的RNA能被保存液有效保護)，建議預實驗后再使用。

儲存條件：15～25℃，有效期24個月。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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