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總RNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F96407
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：248
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50T|100T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：總RNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:總RNA提取試劑盒 50T 100T 

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總RNA提取試劑盒

Total RNA Extraction Kit

50T|100T

CS-01F96407

介紹

操作步驟

1. 樣品處理：

a. 植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。

b. 動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。

c. 貼壁細胞：直接在培養板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。

d. 細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。

e. 血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。

2. 將處理后的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復合物完全分離。

3. 向勻漿樣品中加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置3-5分鐘。

4. 2～8℃ 12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中，把水相轉移到新管中，不要吸到沉淀。

5. 吸附柱前處理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2～8℃ 12000 rpm離心2min，棄廢液。

6. 第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻，加入吸附柱靜置2分鐘，2～8℃ 12000rpm離心2min，棄廢液。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，2～8℃ 12000rpm離心2min，棄廢液。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2～8℃ 12000rpm離心2min，棄廢液。

9. 12000rpm離心2min，棄掉收集管，將吸附柱置于室溫放置數分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。

10. 將吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min即得到RNA。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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