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柱式病毒RNA提取試劑盒2.0

  • 產品貨號：CS-01F96406
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式病毒RNA提取試劑盒2.0現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式病毒RNA提取試劑盒2 0 50次 

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柱式病毒RNA提取試劑盒2.0

Column Virial RNA Isolation Kit 2.0

50次

CS-01F96406

本產品是在柱式病毒RNA提取試劑盒的基礎上開發的、專門用于從血清(血漿)或其他液體樣品中提取微量病毒RNA的升級產品。

產品特點：

1.操作簡單，整個過程只需要20分鐘左右。

2.不需要額外在洗柱液中補加乙醇。

3.靈敏度高，通過RT-PCR檢測到的終靈敏度低于50拷貝/mL，比柱式病毒RNA提取試劑盒更高。

4.安全無毒，不需要使用和氯仿等有機溶液。

5.如果加上病毒離心富集步驟，多可以處理1.5mL液體病毒樣品。

6.與RT-PCR和熒光RT-PCR兼容。

7.價廉物美，性價比遠低于國外同類產品。

8.適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞上清液等無細胞材料。

產品組成：

組分 編號

RNA病毒裂解液 BTN3073

柱式病毒RNA提取試劑盒溶液B BTN180602a

離心吸附柱（窄口） BTN60911

通用洗柱液 BTN60408

RNA洗脫液 BTN71207

保存條件：室溫保存，有效期一年。

使用方法：

1.在1.5mL離心管中加入0.2mL液體病毒樣品(如血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞上清液等)。如果病毒需要富集，可以將1.5mL液體在4℃下24000g冷凍離心60分鐘，移棄1.3mL后繼續操作。

2.加入0.6mL RNA病毒裂解液，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。

? 注意：RNA病毒裂解液在4℃放置后可能會產生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3.加入0.6mL柱式病毒RNA提取試劑盒溶液B，顛倒混勻。此時離心管中混合液的總體積是1.4mL。

4.將0.7mL混合液將轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

5.13000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

6.再將剩余的0.7mL混合液將轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

7.13000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

8.加入0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中，13000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

9.13000g室溫離心半分鐘。

10.在離心吸附柱的濾膜的中部加入30μl RNA洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的1.5mL離心管中，室溫放置2分鐘。

11.13000g室溫離心1分鐘，離心管中收集的樣品即為RNA溶液。

12.RNA樣品可以直接用于RT-PCR或逆轉錄反應，也可放-80℃長期保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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