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本產品是一種常用的的生物樣品取材方法，可以用于PCR等分子生物學分析。取材的主要特點是快捷和非介入性（不會對對象造成傷害），尤其適用于大規(guī)模篩查取樣和特殊群體（如兒童）和組織（如口腔）的取樣。但是，對于野外采集的樣品和跨區(qū)域采集的樣品，如何保存并運輸到統一處理中心一直是一個非常棘手的問題。本產品就是為這一需要而開發(fā)的。

產品特點：

1. 常溫保存時間長達半年，方便了樣品的野外采集和長途運輸。

2. 使用廣泛，適用于各種樣品，包括口腔、鼻腔、陰道等。

3. 價格實惠，提供的試劑足夠保存200個樣品。

4. 跟各種纖維棉兼容。但使用本公司專用效果更佳（因為所有優(yōu)化都是在此專用的基礎上完成的，80801B包裝含200只專用）。

5. 保存的可以用柱式提取其DNA，從一個一般可以提取到0.5 ug 左右的DNA。

6. 一個樣品可以用一個微型離心管保存，大程度地避免了樣品間的交叉污染。

7. 試劑本身安全環(huán)保無毒。

產品組成：

組分編號

非凍型DNA保存液(液A) BTN80802A

保存條件：室溫保存，有效期兩年。

自備試劑及儀器：離心管

使用方法：

1. 將0.5mL非凍型DNA保存液（溶液A）加入到自備的1.5mL塑料離心管中待用。

2. 用涂抹口腔內表面、鼻腔表面或其他待取樣器管的表面約十次。

3. 將放入到加有的1.5mL塑料離心管中，剪去專用柄部，留藥棉頭于離心管中，蓋上離心管管蓋后即可長期保存、運輸。

4. 提取DNA的步驟見柱式。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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