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膜結合DNA清除試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F96343
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：膜結合DNA清除試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:膜結合DNA清除試劑盒 50次 

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膜結合DNA清除試劑盒

Membrane-Bound DNA Scavenger

50次

CS-01F96343

本試劑盒是在無RNase的DNase(BTN90903)的基礎上開發的、專門用于在柱式法總RNA抽提過程中，清除硅膠膜上基因組DNA污染的產品。

產品特點：

1.快速，反應條件經過優化，能在5分鐘內使硅膠膜上的基因組DNA降解。

2. 不含RNase，可以保證RNA分子完整性不受任何影響。

3. 兼容性廣，跟大多數柱式RNA提取試劑盒兼容，可以直接整合進去。不需要在提取到總RNA后再單獨去除里面的DNA污染。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，通用洗柱液和RNA 洗脫液可以室溫保存，有效期一年。

使用方法：

1. 將0.5mL 通用洗柱液加入到已經結合了DNA和RNA的硅膠膜離心吸附柱中，12000rpm室溫離心10-30秒。注意：不能使用離子交換吸附柱，Qiagen公司的部分產品使用的是離子交換吸附柱，一部分是硅膠膜離心吸附柱，一定要在實驗前弄清楚。

2. 配制DNase工作液50μl，即將10μl RNase-free DNase 加入到50μl膜反應液中，在離心管中吹打混勻。注意：對一般的mini型離心吸附柱，膜反應液和DNase的總體積不要大于60μl，否則酶的濃度將降低，影響DNA去除效果。

3. 將上步得到的混合液全部轉移到步預洗得到的離心吸附柱中。

4.室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數情況下的DNA污染。如果DNA沒有徹底降解(可能由于樣品中殘留的雜質抑制了DNase的活性)，此步的保溫時間可以適當延長，直到徹底清除為止。

5. 保溫結束后，直接在離心管中加入0.5mL的通用洗柱液，12000rpm室溫離心10-30秒。

6.干甩一次(12000rpm室溫離心10-30秒)。

7. 將30-100μl RNA 洗脫液加入到離心吸附柱的膜中央，12000rpm室溫離心10-30秒，洗脫液即是無DNA的RNA樣品。可以立即使用或放-70℃長期保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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