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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
蔗糖合成酶(分解方向;SS-Ⅰ)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63831 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
蔗糖是源(葉片等)光合產物向“庫”器官運輸的主要形態。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC
測定原理
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG,采用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二: 液體5mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前每支加入1.2mL試劑二充分溶解待用,現配現用;
試劑四:液體6mL×1瓶,4℃保存。
樣品測定的準備:
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):
SS-Ⅰ活性計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0012x - 0.0492;x為標準品濃度(μg/mL),y為ΔA。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V反總:反應體系總體積,0.05mL; V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0006x - 0.0492;x為標準品濃度(μg/mL),y為ΔA。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W
V反總:反應體系總體積,0.05mL; V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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