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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒(鉬酸銨比色法) | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01S63825 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
CAT(EC
測定原理:
過氧化氫能氧化MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氫氧根的電子成鍵,分子間立即脫水縮合,得到穩定的黃色復合物(H2MoO4•XH2O)n在405nm處有強烈吸收峰,其吸光值和過氧化氫濃度成線性關系。測定出體系剩余過氧化氫在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體100 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:液體25 mL×1瓶,常溫保存;
試劑三:液體60 mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、酶標儀預熱30min以上,調節波長至405 nm。
2、在EP管中加入下列試劑
CAT活性計算:
1、標準曲線:y = 0.09x + 0.0013 R2 = 1 x:體系中過氧化氫濃度變化值(μmol/mL)
y:吸光值差值ΔA
2、血清(漿)CAT活力的計算:
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(μmol /min/mL)= =(ΔA-0.0013)÷0.09×V反總÷V樣÷T
=444.44×(ΔA-0.0013)
3、組織、細菌或細胞中CAT活力計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0013)÷0.09×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
=444.44×(ΔA-0.0013)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化1μmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。
CAT(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0013)÷0.09×V÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=444.44×(ΔA-0.0013)÷W
V反總:反應體系總體積,0.8 mL;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL。
注意事項:
1、預實驗若發現酶活性過高(A測定<0.1),可用提取液適當稀釋樣品后測定,并在計算公式中乘以相應稀釋倍數。
2、若A空白<A測定,一方面可能是酶活性過低,可將反應時間2延長到5min,另一方面可能樣本中雜質干擾嚴重,可將樣本稀釋5倍左右后測定,并在計算公式中代入實際反應時間和乘以相應稀釋倍數。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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