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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
維生素E(Vitamin E,VE)試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63817 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
維生素E(Vitamin E)是一種脂溶性維生素,其水解產物為生育酚,是生物體中最主要的抗氧化劑之一,能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷,維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整性和正常功能,具有延緩衰老、預防溶血性貧血作用,在醫藥、化妝品、保健品、食品行業具有較高的應用價值。
測定原理
VE還原Fe3+為Fe2+,Fe2+與1,10-菲羅啉產生有色絡合物,在530nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、漩渦震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑三:液體2mL×1支,4℃保存。
試劑四:液體6mL×1瓶,4℃保存。
樣本處理
1.組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,勻漿后用提取液定至1mL,定至在漩渦混勻儀上震蕩5min,于25℃,5000g離心10min,取上層測定。
2.細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min)后在漩渦混勻儀上震蕩5min,于25℃,5000g離心10min,取上層測定。
3.血清:取0.1mL,加0.9mL提取液,漩渦儀混勻上震蕩5min,于25℃,5000g離心10min,取上層測定。
測定操作
計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.022x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計算
VE含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V反總÷(V樣×Cpr)
= 90.9×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
VE含量(μg/g 鮮重)= (△A -0.0065)÷ 0.022×V反總÷(V樣×W÷V樣總)
= 90.9×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照細胞數量計算
VE含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)
= 90.9×(△A -0.0065)÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
VE含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V反總÷V樣×10
= 909×(△A -0.0065)
V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.011x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計算
VE含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.011×V反總÷(V樣×Cpr)
= 181.8×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
VE含量(μg/g 鮮重)= (△A -0.0065)÷0.011×V反總÷(V樣×W÷V樣總)
= 181.8×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照細胞數量計算
VE含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.011×V反總÷(V樣×細胞數量÷V樣總)
= 181.8×(△A -0.0065)÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
VE含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷0.011×V反總÷V樣×10
= 1818×(△A -0.0065)
V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
注意事項
1. 若反應體系產生沉淀,需要將樣品進行適當的稀釋,并在計算公式中乘以稀釋倍數。
2. 最低檢出限為29.5μg/g。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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