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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63814 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理:
在酸性環境下,還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的Fe2+-TPTZ的能力反映了總抗氧化能力。
自備實驗用品:
恒溫水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,使用前預冷。
試劑一:液體15mL×1瓶,避光保存。
試劑二:液體1.5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體1.5mL×1瓶,避光保存。
混合液(現配現用):將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合,使用前37℃預溫。
樣品的制備:
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用EDTA抗凝)4℃,5000rpm 離心10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超過30 d)后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
(3) 細胞樣品
按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
操作步驟:
1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至593nm,蒸餾水調零。
2、操作表
總抗氧化能力計算公式:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.8442x-0.0048,R2=0.9979
(1)按樣本質量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/g 鮮重)=(△A+0.0048)÷ 0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=59.228×(△A+0.0048)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg蛋白每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=59.228×(△A+0.0048)÷Cpr
(3)按細胞計算
單位定義:每萬個細胞每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/104cell)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數量(萬個))÷T
= 59.228×(△A+0.0048)÷ 細胞數量(萬個)
(4)按液體體積計算
單位定義:每毫升樣本每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mL)=(△A+0.0048)÷0.8442×1000÷T
= 59.228×(△A+0.0048)
V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:反應中樣品體積,6μL;T:反應時間,20min;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.4221x - 0.0048;R2=0.9979
(1)按樣本質量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/g 鮮重)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=118.455×(△A+0.0048)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg蛋白每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=118.455×(△A+0.0048)÷Cpr
(3)按細胞計算
單位定義:每萬個細胞每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/104cell)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數量(萬個))÷T
= 118.455×(△A+0.0048)÷ 細胞數量(萬個)
(3)按液體體積計算
單位定義:每毫升樣本每分鐘產生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個酶活力單位。
總抗氧化能力(U/mL)=(△A+0.0048)÷0.4221×1000÷T
= 118.455×(△A+0.0048)
V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:反應中樣品體積,6μL;T:反應時間,20min;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
注意事項:
1.試劑二對人體有刺激性,請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴乳膠手套操作。
2.盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑,否則對本試劑盒的檢測結果產生干擾。
3.樣品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑和DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應的還原劑。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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