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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
總巰基測定試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63813 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
生物體內巰基主要包括谷胱甘肽巰基和蛋白質巰基。前者不僅能夠修復氧化損傷的蛋白質,而且參與活性氧清除,后者對于維持蛋白質構象具有重要作用。通過測定總巰基含量和GSH含量,能夠間接測定蛋白質巰基含量。
測定原理:
巰基基團與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應,生成黃色化合物,在412nm處有最大吸收峰。
自備實驗用品:
天平、研缽、恒溫水浴鍋、酶標儀、96孔板、乙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體18mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體1mL×1管,4℃避光保存。
樣品的制備:
1.按照組織質量(g):水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水)進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.血清,培養液:稀釋5倍后測定,可取0.1mL樣本,加入0.4mL蒸餾水,混勻,置冰上待測。
操作步驟:
1、酶標儀預熱30min,調節波長至412nm。
2、操作表
在96孔板中加入如下試劑
計算公式:
總巰基標準曲線:y = 1.8111x - 0.0037,R2 = 1,x為標品濃度,單位μmol/mL,y為吸光度ΔA。
1. 組織:
(1)按樣本重量計算
總巰基含量(μmol/g 鮮重)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V樣總÷W
=0.552×(ΔA+0.0037)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
總巰基含量(μmol/mg prot)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V樣總÷Cpr
=0.552×(ΔA+0.0037)÷Cpr
2. 血清、培養液:
總巰基含量(μmol/L)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×5×103
=2761×(ΔA+0.0037)
V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質量,g ;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;5:血清,培養液等液體樣本稀釋倍數;103 :1mmol/ L=103μmol/ L
注意事項
最低檢出限為10μmol/L。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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