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標(biāo)簽:葡萄糖氧化酶(glucose oxidase GOD)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
小鼠糖皮質(zhì)激素受體αelisa檢測(cè)試劑盒樣本處理及要求
兔β淀粉樣蛋白1-40elisa檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)
谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
非紅細(xì)胞血影蛋白β4(SPTβN4)ELISA試劑盒樣本處理及要求
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
公司上萬(wàn)種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國(guó)內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買(mǎi)的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63812 |
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
GOD(EC
測(cè)定原理
GOD催化產(chǎn)生H2O2,過(guò)氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在500 nm有特征吸收峰,顏色深淺與GOD活性成線性關(guān)系。
試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
緩沖液:液體30mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月;
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至500nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一和試劑二的配制:參見(jiàn)試劑的組成和配制。
3、煮沸樣本的準(zhǔn)備:取200μL樣本至新的EP管中,95℃水浴10min,冷卻至室溫后,8000g 4℃離心10min,取上清作為對(duì)照管的煮沸樣本待測(cè)。
4、測(cè)定操作表
GOD活力單位的計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169;x為H2O2標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為ΔA。
1、血清(漿)GOD活力的計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織GOD活力的計(jì)算
(1)按蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義:每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.125mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
回歸方程為y = 1.4174x - 0.0169;x為H2O2標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為ΔA。
1、血清(漿)GOD活力的計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷V樣÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織GOD活力的計(jì)算
(1)按蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義:每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個(gè)酶活力單位。
GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.235×(ΔA+0.0169)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.125mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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