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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
單寧含量試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01S63806 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
單寧是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物,又稱植物多酚。具有獨特的化學性質和多種生理活性,如能與蛋白質、生物堿、多糖結合;能與多種金屬離子發生絡合或靜電作用;具有止血、抑制微生物、抗過敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。
測定原理:
單寧在堿性環境下與磷鉬酸反應,生成藍色化合物,在760nm處有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體4mL× 1瓶,4℃保存;
試劑二:液體3mL × 1瓶,4℃保存;
單寧的提取:
按照組織質量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),充分勻漿后轉移到EP管中,80℃水浴提取30min, 8000 g,25℃離心10 min,取上清液待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至760nm處,蒸餾水調零;試劑一和試劑二37℃預熱10min以上;
2、操作表:
單寧含量計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 1.6418x +0.0134;x為標準品濃度(mg/mL),y為ΔA(A測定-A對照)。
2、按樣本鮮重計算:
單寧含量(mg /g鮮重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(W×V1÷V2)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算:
單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.005mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
b.用96孔板測定的計算公式如下:
1、標準條件下測定的回歸方程為y = 0.8209x+0.0134;x為標準品濃度(mg/mL),y為ΔA(A測定-A對照)。
2、按樣本鮮重計算:
單寧含量(mg/g鮮重)=[(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(W×V1÷V2)=1.218×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算:
單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(V1×Cpr)=1.218×(ΔA-0.0134)÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.005mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
注意:
1、ΔA控制在0.02-0.5范圍內,若ΔA大于0.5,將樣本提取上清液用蒸餾水稀釋10倍后檢測,計算公式中乘以相應稀釋倍數。
2、標準曲線線性范圍為:0.025mg/mL-0.5mg/mL。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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