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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
多功能氧化酶((mixed function oxidase,MFO)試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01S63801 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定原理:
MFO催化對硝基苯甲醚產生對硝基苯酚,在400nm下有特征吸光值。
自備用品:
酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。
試劑組成和配制:
提取液:液體120mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體24mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:粉劑×3管,-20℃保存;臨用前取一管加入1.5mL水溶解,現配現用。
試劑三:液體24mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體64mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
按照組織質量(g):提取液(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、酶標儀預熱30min以上,調節波長至400nm。
2、在EP管中依次加入如下試劑
MFO活性計算:
標準曲線:y = 0.0119x + 0.0021,R2 = 0.9997;y,吸光度;x,標準品濃度,單位nmol/mL。
(1)按樣本質量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產生1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
MFO(nmol/min/g 鮮重)=(△A-0.0021)÷0.0119×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=8.4×(△A-0.0021)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
MFO(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0021)÷0.0119×V總÷(V樣×Cpr)÷T
=8.4×(△A-0.0021)÷Cpr
V總:最終萃取液體積,0.6 mL;V樣:反應中樣品體積,200μL;T:反應時間,30min;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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