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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
二氫黃酮醇還原酶(Dihydro flavonol reductase,DFR)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63799 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關鍵酶,在決定植物的花色、葉色、果色和其他經濟器官的色澤及其營養品質方面起著重要作用。
測定原理
二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產生兒茶素,可與香草醛縮合形成紅色化合物,在500nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
研缽、低溫離心機、震蕩儀、氮吹儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、無水乙醇、乙酸乙酯。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體1.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:液體30mL×1瓶,4℃避光保存。
酶液提取
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定操作表
1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至500nm。
2、操作表
酶活性計算公式
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.0184x+0.0002,R2=0.999
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷(V樣×Cpr)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/g 鮮重)= (△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷W
V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,30min
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.0092x+0.0002,R2=0.999
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0092×V反總÷(V樣×Cpr)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/g 鮮重)= (△A-0.0002)÷0.0092×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷W
V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,30min
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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