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標(biāo)簽:葉綠體復(fù)合體Ⅴ試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 葉綠體復(fù)合體Ⅴ試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01Ｓ63794 |
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
葉綠體復(fù)合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學(xué)梯度催化ATP合成，也可逆過程水解ATP。復(fù)合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶。
測(cè)定原理：
復(fù)合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi，通過測(cè)定Pi增加速率來測(cè)定復(fù)合體Ⅴ活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入2mL蒸餾水，充分溶解備用，用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三：8mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入4mL蒸餾水，充分混勻；溶解后4℃保存一周；
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分混勻；溶解后4℃保存一周；
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分混勻；溶解后4℃保存一周；
試劑七：液體10mL×1 瓶，室溫保存。
定磷試劑的配制：按H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染（請(qǐng)根據(jù)需要，用多少配多少）。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
葉綠體的提。
①稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿，很快研磨或搗碎，30秒內(nèi)完成，使之成為勻漿液。
②將勻漿液于200g（離心率），4℃離心1min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，1500g，4℃離心5min。
④棄上清液，于沉淀中加入0.5mL試劑一混勻配成葉綠體懸浮液；靹蚝鬁y(cè)定葉綠體酶活性。
測(cè)定步驟：
1、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）
復(fù)合體Ⅴ活性計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 1.274x + 0.004；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mmol/L），y為A值。
1、組織中復(fù)合體Ⅴ活性的計(jì)算:
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性（nmol/min/mg prot）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反總×106]÷(V樣×Cpr) ÷T
=62.8× (ΔA-0.004) ÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性（nmol/min /g 鮮重）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反總×106]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T =31.37× (ΔA-0.004) ÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性（nmol/min /104 cell）=[(ΔA-0.004) ÷1.274×V反總×106]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.063× (ΔA-0.004)
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.2×10-4 L； V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，0.5 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.637x + 0.004；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mmol/L），y為A值。
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性（nmol/min /mg prot）=[(ΔA-0.004) ÷0.637×V反總×106]÷(V樣×Cpr) ÷T
=125.6× (ΔA-0.004) ÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性（nmol/min /g 鮮重）=[(ΔA-0.004)÷0.637×V反總×106]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=62.74× (ΔA-0.004) ÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機(jī)磷定義為一個(gè)酶活性單位。
復(fù)合體Ⅴ活性（nmol/min /104 cell）=[(ΔA-0.004)÷0.637×V反總×106]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T
=0.126× (ΔA-0.004)
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.2×10-4 L； V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，0.5 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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