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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
活性污泥中性蛋白酶(S-NPT)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63786 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化,其水解產物是高等植物的氮源之一。S-NPT在中性環境下催化蛋白質水解,與土壤有機質含量、氮素及其他土壤性質有關。
測定原理:
中性條件下,S-NPT可將酪蛋白水解產生酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;在680nm有特征吸收峰。
實驗中所需儀器及設備:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水
試劑組成和配置:
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入5ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入50μL試劑七使粉劑潤濕,然后加入10ml試劑一,轉入燒杯中沸水浴磁力攪拌溶解后待用;用不完的試劑4℃保存;(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發,一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用)。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入20ml蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存;
試劑五:液體3mL×1瓶,4℃保存;
試劑六:液體1.5mL×1支,50μg/ml標準酪氨酸溶液,4℃保存;
試劑七:液體1.5mL×1支,4℃保存;
樣品處理:
胞外酶:取1mL樣本,8000g 25℃離心10min,取上清液測定。
胞內酶: 取1mL樣本,8000g 25℃離心10min,棄上清,在沉淀中加入1mL蒸餾水,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),8000g 25℃離心10min,取上清液測定。
測定操作:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至680nm,蒸餾水調零。
2、試劑二、三和四40℃水浴10min。
3、樣本測定:
S-NPT活性計算:
(1)按樣本體積計算
單位定義:每min每mL樣本產生1μg酪氨酸為一個 S-NPT活力單位。
S-NPT(μg/min/mL)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷V樣÷T=35×(A測定管-A對照管)÷A標準管
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每min每mg組織蛋白產生1μg酪氨酸為一個 S-NPT活力單位。
S-NPT(μg/min/mg prot)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷V樣÷T÷Cpr =35×(A測定管-A對照管)÷A標準管÷Cpr
C標準管:標準管濃度, 50μg/mL;V反總:反應體系總體積,0.21mL;T:反應時間,30min; V樣:樣本體積,0.01mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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