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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase, α-GC)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63767 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
α-GC(EC
測定原理:
α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入12mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至400nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
α-GC活力計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027;x為標準品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.114×(ΔA +0.0027)
V反總:反應體系總體積,0.3mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g; 500:細胞或細菌總數,500萬;T:反應時間,30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027;x為標準品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
α-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.171×(ΔA +0.0027)
V反總:反應體系總體積,0.3mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g; 500:細胞或細菌總數,500萬;T:反應時間,30min。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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