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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
小鼠糖皮質(zhì)激素受體αelisa檢測試劑盒樣本處理及要求
兔β淀粉樣蛋白1-40elisa檢測試劑盒注意事項(xiàng)
谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)測試盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
非紅細(xì)胞血影蛋白β4(SPTβN4)ELISA試劑盒樣本處理及要求
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-GA)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63766 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
β-1,3-GA( EC?
測定原理:
β-1,3-GA水解昆布多糖,內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生還原末端,通過測定還原糖生成速率來計(jì)算其酶活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入2mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體30mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至550nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在1.5mL EP管中依次加入下列試劑):
β-1,3-GA活性計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0958x -0.0192;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)β-1,3-GA活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中β-1,3-GA活力的計(jì)算
(1) 按蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192) ÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.035mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0479x -0.0192;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)β-1,3-GA活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中β-1,3-GA活力的計(jì)算
(1)按蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)=20.876×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192) ÷W
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。
β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192)
V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.035mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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