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| 產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
| 海藻糖酶（Trehalase，THL）試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01Ｓ63759 |
注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
THL（EC
測定原理：
THL催化海藻糖產生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映THL活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體 10ml×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體 10ml×1瓶，4℃保存；（若出現結冰現象，可37℃水浴溶解后使用）
樣品測定的準備：
1、細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至505nm，蒸餾水調零。
2、調節水浴鍋至95度。
3、工作液的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合，用多少配多少。
4、加樣表：
THL活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000
=366× (ΔA+0.0042) ÷Cpr
3、按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=366×(ΔA+0.0042)÷W
4、按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(500 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=0.732×(ΔA+0.0042)
5、按血清（漿）體積計算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(V液 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=3660×(ΔA+0.0042)
V樣：加入樣本體積：0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；V反總：反應體系總體積，0.08mL；V液：加入血清（漿）體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬；T：反應時間，15min；
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.2429x - 0.0042，R2 = 0.9999；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000
=732× (ΔA+0.0042) ÷Cpr
3、按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=732×(ΔA+0.0042)÷W
4、按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反總÷(500 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=1.464×(ΔA+0.0042)
5、按血清（漿）體積計算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
THL活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反總÷(V液 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000
=7320×(ΔA+0.0042)
V樣：加入樣本體積：0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；V反總：反應體系總體積，0.08mL；V液：加入血清（漿）體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬；T：反應時間，15min；
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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