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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
幾丁質酶(Chitinase)試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63758 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
幾丁質主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類的細胞壁中。而幾丁質酶(EC
測定原理:
幾丁質酶水解幾丁質產生N-乙酰氨基葡萄糖,進一步與對二甲氨基苯甲醛產生紅色化合物,在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質酶的活性。
自備實驗用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(土壤樣品專用)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體105mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。(若出現結晶,可80℃左右加熱溶解后使用)
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
2.真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
3.培養液:直接測定。
測定操作表:
計算公式:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.3088-0.003,R2=0.9995
計算公式:
1、按照樣本重量計算
酶活性定義:37℃條件下,每克組織每小時分解幾丁質產生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
幾丁質酶活性(mg/h/g鮮重)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=8.096×(ΔA +0.003)÷W
2、按照蛋白質濃度計算
酶活定義:37℃條件下,每毫克蛋白每小時分解幾丁質產生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 8.096×(ΔA +0.003)÷Cpr
3、按細胞數量計算
酶活定義:37℃條件下,每104個細胞每小時分解幾丁質產生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)
=8.096×(ΔA +0.003)÷細胞數量
4、按液體體積計算
酶活定義:37℃條件下,每毫升培養液每小時分解幾丁質產生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷V樣=8.096×(ΔA +0.003)
V反總:反應體系總體積,1mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.4mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y=0.1544x-0.003,R2=0.9995
計算公式:
4、按照樣本重量計算
酶活性定義:37℃條件下,每克組織每小時分解幾丁質產生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。
幾丁質酶活性(mg/h/g鮮重)=(ΔA+0.003)÷0.1544×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=16.192×(ΔA +0.003)÷W
5、按照蛋白質濃度計算
酶活定義:37℃條件下,每毫克蛋白每小時分解幾丁質產生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 16.192×(ΔA +0.003)÷Cpr
6、按細胞數量計算
酶活定義:37℃條件下,每104個細胞每小時分解幾丁質產生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)
=16.192×(ΔA +0.003)÷細胞數量
4、按液體體積計算
酶活定義:37℃條件下,每毫升培養液每小時分解幾丁質產生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。
幾丁質酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷V樣=16.192×(ΔA +0.003)
V反總:反應體系總體積,1mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.4mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
注意事項:
1、反應結束后立即進行比色。
2、試劑四有一定的毒性,請操作時做好防護措施。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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