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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
單胺氧化酶(Monoamine Oxidase,MAO)試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63753 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
MAO(EC
測定原理:
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應的醛,進一步氧化成酸;底物在360nm處有特征吸收峰,測定360nm光吸收下降的速率,計算MAO活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體120mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1管,4℃避光保存。
粗酶液提取:
1.稱取約0.1g樣品,加1 mL預冷的提取液一充分冰浴勻漿,1000g,4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉移到另一預冷的離心管,10000g,4℃,離心30min,棄上清;加入1mL預冷的提取液二,震蕩混勻,16000g,4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預冷的1mL 試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定)。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,棄沉淀;把上清轉移到另一預冷的離心管,10000g,4℃,離心30min,棄上清;加入1.0 mL預冷的提取液二,震蕩混勻,16000g,4℃,離心40min,棄上清;沉淀加入預冷的1.0 mL 試劑一,震蕩混勻,即粗酶液(可用于可溶性蛋白濃度測定),取上清置于冰上待測。
3.血清:直接測定。
測定操作表:
1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至360nm。
2、操作表
MAO活性計算公式:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、按蛋白含量計算
酶活定義:37℃,pH7.6時,每毫克蛋白質1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min / mg prot)= ×V反總÷(V樣× Cpr)÷T= 114×ΔA÷Cpr
2、按樣本質量計算:
酶活定義:37℃,pH7.6時,每克樣品1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min / g 鮮重)=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 114×ΔA÷ W
3、按照細胞數量計算
酶活定義:37℃,pH7.6時,每104個細胞1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min / 104 cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T
= 114×ΔA÷細胞數量
4、按照液體體積計算
酶活定義:37℃,pH7.6時,每升血清1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min /L)=×V反總÷V樣=114×ΔA
ε:底物摩爾消光系數,1460L /mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應時間,60min,W:樣本質量,g
a.用96孔板測定的計算公式如下
1、按蛋白含量計算
酶活定義:37℃,pH7.6時,每毫克蛋白質1min內轉化1 nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min / mg prot)= ×V反總÷(V樣× Cpr)÷T= 228×ΔA÷Cpr
2、按樣本質量計算:
酶活定義:37℃,pH7.6時,每克樣品1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min / g 鮮重)=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T = 228×ΔA÷ W
3、按照細胞數量計算
酶活定義:37℃,pH7.6時,每104個細胞1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min / 104 cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T
= 228×ΔA÷細胞數量
4、按照液體體積計算
酶活定義:37℃,pH7.6時,每升血清1min內轉化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。
DAO活性(nmol/min /L)=×V反總÷V樣=228000×ΔA
ε:底物摩爾消光系數,1460L /mol /cm; d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應時間,60min,W:樣本質量,g
注意事項:
1、吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變。
2、樣品蛋白質含量需要另外測定。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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