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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
木質素過氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63751 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
木質素過氧化物酶(EC
測定原理
木質素過氧化物酶催化天青脫甲基,在651nm處測定吸光值減少。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、低溫離心機、酶標儀、96孔板、可調式移液器、冰。
試劑組成和配制
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入115mL蒸餾水,充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存一個月。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體5mL×1支,4℃保存。
酶液提取
1.組織:按照質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
2.細胞:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
3.培養液或其它液體:直接檢測。
測定操作
1、酶標儀預熱30min以上,調節波長至651nm。
2、臨用前按每個樣本試劑一:試劑二:試劑三=80:40:40(μL)的比例配制工作液,現配現用。
3、在96孔板中依次加入如下試劑
酶活計算公式
1.按照蛋白濃度計算
酶活性定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。
LiP活性(U/mg prot)= ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr
2.按照樣本質量計算
酶活性定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。
LiP活性(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =250×ΔA÷W
3.按照細胞數量計算
酶活性定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。
LiP活性(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=0.5×ΔA
4.按照液體體積計算
酶活性定義:每mL血清(漿)在每mL反應體系中每分鐘A651變化0.01為一個酶活力單位。
LiP活性(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =250×ΔA
V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,2min
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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