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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應各大科研單位和學校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應商。公司嚴把質(zhì)量關(guān),確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
漆酶(Laccase)試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63750 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
漆酶(CE
測定原理
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基,在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS,測定ABTS自由基的增加速率,可計算得漆酶活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存。
工作液:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加15mL試劑一溶解;用不完的試劑4℃保存一周。
酶液提取
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心30min,取上清,置冰上待測。
2.細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
3.細胞培養(yǎng)液:直接檢測。
測定操作表
注意:
1、極少數(shù)樣本在60℃水浴20min后會出現(xiàn)沉淀,可經(jīng)過8000g 25℃離心10min后,取上清檢測,例如成熟的水稻葉片樣本。
2、為確保檢測準確性,若ΔA大于1,將樣本用提取液稀釋2~10倍后重新檢測,計算公式乘以相應稀釋倍數(shù)。
酶活性計算公式
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1.按照蛋白濃度計算
酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 9.26×△A÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義:每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /g 鮮重)= ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 9.26×△A÷W
3.按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義:每104個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /104 cell)= ×V反總÷(V樣×細胞數(shù)量÷V樣總)÷T= 9.26×△A÷細胞數(shù)量
4.按照液體體積計算
酶活性定義:每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /L)= ×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε:ABTS毫摩爾消光系數(shù):36L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,0.3mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應時間,20min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
1.按照蛋白濃度計算
酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 18.52×△A÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義:每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /g 鮮重)= ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T= 18.52×△A÷W
3.按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義:每104個細胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /104 cell)= ×V反總÷(V樣×細胞數(shù)量÷V樣總)÷T
= 18.52×△A÷細胞數(shù)量
4.按照液體體積計算
酶活性定義:每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性(nmol/min /L)= ×V反總÷V樣÷T= 18520×△A
ε:ABTS毫摩爾消光系數(shù):36L/mmol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應總體積,0.3mL;V樣:反應中樣本體積,0.045mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應時間,20min
木質(zhì)素(Lignin)含量試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細胞壁的成分之一,是由聚合的芳香醇構(gòu)成的一類物質(zhì),存在于木質(zhì)組織中,主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細胞壁。木質(zhì)素主要位于纖維素纖維之間,起抗壓作用。
測定原理
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在280nm處有特征吸收峰,280nm的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
需自備的儀器和用品、
天平、40目篩,玻璃試管、燒杯、離心機,恒溫水浴鍋、封口膜、烘箱、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸,濃硫酸。
試劑組成和配制
取200μL于微量石英比色皿/96孔板,測定280nm處吸光值A。分別記為A空白管和A測定管,ΔA=A測定管-A空白管
計算公式
標準曲線:y = 0.0347x+0.0068,R2=0.9889
Lignin(mg/g干重)= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反總×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50
V反總:反應總體積:1.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:稀釋倍數(shù)
注意事項
1.試劑一有毒性,請操作時做好防護措施,加熱前必須用封口膜密封,以防氣體溢出。
2.加熱過程中有劇烈反應,震蕩時輕搖,以免壓力過大噴出造成人身傷害。
3.試劑三具有強刺激性,建議操作過程全部在通風櫥子操作。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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