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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
還原型抗壞血酸(ascorbic acid,AsA)含量測定試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63737 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
AsA又稱維生素C。AsA是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細胞中最重要的抗氧化劑,AsA在保護葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用,也是衡量農作物產品品質的重要指標之一。
測定原理:
在乙酸溶液中,抗壞血酸與固藍鹽B反應生成黃色的草酰肼–2–羥基丁酰內酯衍生物,在最大吸收波長420處測定吸光度。
自備儀器和用品:
研缽、冰、低 溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前配制,每瓶加入7 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑4℃下可保存3天。
樣品中AsA提取:
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);8000g,4℃離心20min,取上清液置冰上混勻待測。
3. 血清等液體:直接測定。
AsA測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到420 nm,蒸餾水調零。
2.在EP管中加入下列試劑
AsA含量計算公式:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線y = 0.0088x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白濃度計算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V樣÷(Cpr×V樣)
=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
AsA(μg/g 鮮重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
=113.63×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按細胞數量計算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V樣÷(細胞數量×V樣÷V樣總)
=113.63×(ΔA+0.018)÷細胞數量
(4)按液體體積計算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088
=113.63×(ΔA+0.018)
V樣:加入樣品體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量(g)。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線y = 0.0044x - 0.018 ,R2 = 0.9978
(1). 按蛋白濃度計算
AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V樣÷(Cpr×V樣)
=227.27×(ΔA+0.018)÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
AsA(μg/g 鮮重) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
=227.27×(ΔA+0.018)÷W
(3). 按細胞數量計算
AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0044×V樣÷(細胞數量×V樣÷V樣總)
=227.27×(ΔA+0.018)÷細胞數量
(4)按液體體積計算
AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0044
=227.27×(ΔA+0.018)
V樣:加入樣品體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量(g)。
注意事項:
1.試劑三現配現用,配制好的4℃保存,3天內使用完。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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