產品目錄

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態。此外，NADH/NAD+比值升高也可

商品介紹：

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

酶標儀、臺式離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；

堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；

試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；

試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；

試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；

試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。

NAD+和NADH的提取

1 血清（漿）中NAD+和NADH的提取

NAD+的提取：按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。

NADH的提取：按照血清（漿）體積（mL）：堿性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2組織中NAD+和NADH的提取：

NAD+的提取：按照組織質量（g）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。

NADH的提取：按照組織質量（g）：堿性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1g組織，加入1mL堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3 細胞或細菌中NAD+和NADH的提取：

NAD+的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：酸性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL酸性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g?4?℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。

NADH的提取：先收集細胞或細菌到離心管內，棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：堿性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL堿性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g?4?℃離心10min；取500μL上清液，加入500μL酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。

2、加樣表(在1.5mL棕色EP管中按下表依次加樣）：

注意事項

1、如果一次性測定樣本數較多，可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。

2、對照管和測定管的測定步驟的區別：對照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六；測定管加完試劑一、二、三、四和五后必須反應20min后再加試劑六。

3、反應過程中注意避光。

4、若NAD+測定中△A（A2-A1）≤0.0302，NADH測定中△A（A2-A1）≤0.0222，說明樣本中輔酶含量較低，已低于檢測限，可做如下調整：（1）將測定管避光靜置時間20min延長到60min；（2）在提取階段增加取樣量，即取0.2g樣本或0.2mL樣本加入1mL提取液。

5、由于每一個測定管需要設一個對照管，本試劑盒100管保證測48個NAD+或NADH.

NAD+和NADH含量的計算

（一）NAD+含量的計算

標準條件下的回歸曲線為y = 0.1475x + 0.0302，R2 = 0.9978；其中y為△A，x為NAD+濃度nmol/mL

1、血清（漿）中NAD+含量計算

NAD+含量(nmol/mL）=[(△A -0.0302）÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302）

2、組織、細菌或細胞中NAD+含量計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

NAD+ (nmol/mg prot）=[(△A -0.0302）÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302）÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

NAD+ (nmol/g 鮮重）= [(△A -0.0302）÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302）÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

NAD+ (nmol/104 cell）=[(△A -0.0302）÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302）

（二）NADH含量的計算

標準條件下的回歸曲線為y = 0.1404x + 0.0222，R2 = 0.9976；其中y為△A，x為NADH濃度nmol/mL

1、血清（漿）中NADH含量計算

NADH含量(nmol/mL）= [ (△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222）

2、組織、細菌或細胞中NADH含量計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

NADH (nmol/mg prot）= [ (△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222）÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

NADH (nmol/g 鮮重）=[(△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222）÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

NADH (nmol/104 cell）= [ (△A -0.0222）÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222）

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，2mL；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。

注意：最低檢測限為0.1nmol/mL或0.1nmol/g鮮重或0.001nmol/mg prot

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關法律、法規，尊重網上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。

2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經本站同意，任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。

您感興趣的產品*
您的單位*
聯系人*
聯系電話*
詳細地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*

同類產品

訂購流程

訂貨流程

產品訂購說明:

1、報價含普票、運費。

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發損壞產品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。

付款方式

普票匯款信息

賬戶名：上海生物

開戶行：中國銀行山東省分行營業部

賬號：2169 2341 6278

為方便廣大客戶辦理貨款我公司提供多個銀行的賬戶，學校、醫院客戶購買產品如因單位財務制度原因可先發貨待報賬后匯款，請及時告知銷售人員已做具體操作。

世俱杯2025赛程_中国足彩网首页官网_埃弗顿vs托特纳姆热刺_中国女排现状 - 奥运女足历届冠军一览表

輔酶ⅠNAD(H)含量試劑盒微量法100管/48樣

產品目錄

聯系我們

技術服務

商品詳情購物流程代測服務付款方式常見問題

在線咨詢

同類產品

訂貨流程

付款方式