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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
甲醛脫氫酶(Formaldehyde Dehydrogenase,F(xiàn)DH)試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63724 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
甲醛是一種能與蛋白質(zhì)、核酸和脂類產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的活潑化合物,對所有生物都具有很高毒性。甲醛脫氫酶作為含鋅中等鏈醇脫氫酶(ADH)的家庭成員之一,廣泛存在于原核和真核生物中,該酶能利用NAD+作為輔酶,將有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途徑中的關(guān)鍵酶。
測定原理
甲醛脫氫酶催化甲醛和NAD+產(chǎn)生NADH,在340nm處的吸光值會增加,測定340nm處的吸光值變化,可計算得到甲醛脫氫酶的活性。
自備實驗用品及儀器
天平、離心機、酶標儀、96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入6mL水溶解待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1支,4℃保存;臨用前加入1.5mL水溶解待用。
試劑四:液體1.5mL×1支,4℃避光保存。
FDH提取
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心20min。
2.細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.液體:直接檢測。
測定操作表
1、酶標儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm。
2、操作表
在96孔板中加入如下試劑
FDH酶活計算
(1)按蛋白濃度計算
酶活定義:每毫克蛋白每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
FDH酶活(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T = 643×△A÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:每克樣品每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
FDH酶活(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T =643×△A÷W
(3)按照細胞數(shù)量計算
酶活定義:每104個細胞每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
FDH酶活(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量(萬個))÷T= 643×△A÷細胞數(shù)量
(4)按液體體積計算
酶活定義:每mL樣本每分鐘催化還原1nmol NAD+的酶量為1個酶活單位。
FDH酶活(nmol/min/mL)= ×V反總÷V樣÷T=643×△A
:NADH微摩爾消光系數(shù),6.22×10-3 L/μmol/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T,反應(yīng)時間,5min;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
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2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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