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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
谷丙轉氨酶(GPT)活性測定試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63697 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
GPT(EC
測定原理
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸發生轉氨基反應,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不僅終止上述反應,而且與酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在堿性條件下呈紅棕色,可以在505nm讀取吸光值并計算酶活力。
試驗中所需的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:液體2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑三:液體25 mL×1瓶,4℃保存;
樣品測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至505nm,蒸餾水調零。
2、在EP管或在96孔板中加入下列試劑
計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸曲線, y = 0.4228x+0.0003 (x為標準品濃度,umol/mL;y為ΔA)。
2、血清(漿)GPT活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0003)÷0.4228÷T×103=118.26×(ΔA-0.0003)
3、細胞、細菌和組織中GPT活力的計算
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =118.26×(ΔA-0.0003)÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =118.26×(ΔA-0.0003)÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.0003)÷0.4228×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.236×(ΔA-0.0003)
V1:加入反應體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,20min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
b.使用96孔板測定的計算公式如下:
1、標準條件下測定的回歸曲線, y = 0.2114x+0.0003 (x為標準品濃度,umol/mL;y為ΔA)。
2、血清(漿)GPT活力的計算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0003)÷0.2114÷T×103=236.5×(ΔA-0.0003)
3、細胞、細菌和組織中GPT活力的計算
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0003)÷0.2114×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =236.5×(ΔA-0.0003)÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
(2) 按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA-0.0003)÷0.2114×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =236.5×(ΔA-0.0003)÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
GPT(nmol/min/104 cell)=[(ΔA-0.0003)÷0.2114×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.473×(ΔA-0.0003)
V1:加入反應體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,20 min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
1、標準曲線線性范圍為:0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、ΔA線性范圍為:0.01 -1。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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