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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
賴氨酸(lysine,Lys)含量測定試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01S63696 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
賴氨酸是人體必需氨基酸之一,能促進人體發育、增強免疫功能,并有提高中樞神經組織功能的作用。賴氨酸為堿性必需氨基酸。由于谷物食品中的賴氨酸含量甚低,且在加工過程中易被破壞而缺乏,故稱為第一限制性氨基酸。
測定原理:
蛋白質中的賴氨酸具有一個游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質,其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數目相同,而且僅有—個游離氨基(ε-NH2),所以通常用亮氨酸配制標準液。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水、水浴鍋。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入12.5mL試劑三充分溶解混勻;
試劑二:液體12.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:60%乙醇,自備。
賴氨酸提取:
樣本烘干粉碎,稱取約0.01g樣本,加入1mL提取液,充分勻漿。80℃水浴提取20min,冷卻后10000g離心10min,取上清待測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至570nm,蒸餾水調零。
2、工作液的配制:取10mL試劑一與10mL試劑二混合搖勻,取上清備用。用不完的試劑4℃保存。
3、在有蓋EP管中加入下列試劑:
賴氨酸含量計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0062x - 0.0212;x為賴氨酸含量(μg/mL),y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質量計算
賴氨酸含量(μg/g干重)=[(△A +0.0212)÷0.0062×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=185.73×(△A+0.0212) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;1.1515,校正系數。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0031x - 0.0212;x為賴氨酸含量(μg/mL),y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計算
賴氨酸含量(μg/mg prot)=[(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(Cpr ×V1)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷Cpr
2.按照樣本質量計算
賴氨酸含量(μg/g干重)= [(△A +0.0212)÷0.0031×V1]÷(W ×V1÷V2)×1.1515
=371.45×(△A+0.0212) ÷W
V1:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;1.1515,校正系數。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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