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公司上萬種科研產品,主要供應各大科研單位和學校,是國內眾多科研單位的供應商。公司嚴把質量關,確保每一個出廠產品質量合格,讓您買的省心,用得放心。
產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
脂氧合酶(LOX)活性測定試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63684 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
LOX廣泛存在于動植物組織中,催化不飽和脂肪酸氧化反應,導致膜脂過氧化。在生物體的生長發育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。
測定原理:
LOX催化亞油酸氧化,氧化產物在280nm處有特征吸收峰;測定280nm吸光度增加速率,來計算LOX活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可調式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1支,4℃保存。
粗酶液提取:
按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
測定:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上,調節波長到280 nm,蒸餾水調零。
2. 在試劑三中加入10mL試劑二(振蕩混勻1min),在30℃水浴中預熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存。
3. 對照管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二,30℃反應30min后,記錄A對照。
4. 測定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑三,30℃反應30min后,記錄A測定。
5. ΔA=A測定-A對照
LOX活性計算:
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.01個單位為1個酶活單位。
LOX (U/mg prot) =ΔA×V反總÷(Cpr×V樣)÷T×100
= 33.33×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.01個單位為1個酶活單位。
LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×100
= 33.33×ΔA÷W
Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,需另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒;V反總:反應體系總體積,200μL=0.2mL;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02mL;W :樣品質量,g;V樣總:上清液總體積,1mL;T:反應時間,30min。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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