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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
總膽固醇(total cholesterol,TC)含量測定試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63682 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。
測定原理:
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉化為FC;進一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm有特征吸收峰,其顏色深淺與TC含量成正比。
自備儀器和用品:
水浴鍋、可調式移液槍、酶標儀、96孔板。
試劑組成和配置:
試劑一:異丙醇100mL(自備);
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體40μL×1瓶,4℃保存;
TC標準品:液體1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
TC的提取:
1、組織中TC的提取:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清,即TC待測液。
2、細胞、細菌中TC的提取:先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內,棄上清,加1mL試劑一,超聲波破碎1min(強度20%,超聲2s,停1s),即TC待測液。
3、血清(漿)等樣品:直接測定。
測定操作:
1. /酶標儀預熱30 min,調節波長到500 nm。
2. TC工作液的配制:臨用前,吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中,充分溶解后再全部轉移回試劑二瓶中,充分混勻,TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標準管:依次在96孔板中加入20μL FC標準液和180μL TC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A標準管。
4. 測定管:依次在96孔板中加入20μL FC待測液和180μLTC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
5. 空白管:依次在96孔板中加入20μL 試劑一和180μLTC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
注意:標準管和空白管只需測定一次。
計算公式:
1. 血清(漿)中TC含量計算:
TC(μ mol /dL)=C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)×100
=50×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)
C標準液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 組織中TC含量計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
TC(μ mol / mg prot)= C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本質量計算
TC(μ mol / g 鮮重)= C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準液:0.5μmol/mL;樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g/mL
3. 細胞、細菌中TC含量計算:
TC(μ mol /104 cell)=C標準液×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷細菌或細胞(104 cell /L)
=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)÷細菌或細胞(104 cell /L)
C標準液:0.5μmol/mL。
最低檢出限為1nmol/mL。
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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