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標簽:植物花色苷含量試劑盒
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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
植物花色苷含量試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01S63677 |
注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素,屬黃酮類化合物。花色苷廣泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實中,使其呈現由紅到紫等不同顏色,是植物主要的呈色物質。
測定原理:
采用pH示差法測定花色苷含量,當pH為1.0時花色苷在530nm處有最大吸收峰,而當pH為4.5時,花色苷轉變為無色查爾酮形式,在530處無吸收峰, 利用此特性分別測定在不同pH下的530nm和700nm處的吸光度值。pH示差法減少了溶液pH和溶劑差異的影響,排除了其他非花色苷類物質對檢測結果的干擾。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100 mL× 1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20 mL× 1瓶,4℃保存;
試劑二:液體20 mL × 1瓶,4℃保存;
花色苷的提取:
按照烘干樣品質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g烘干樣品,加入1mL提取液),充分勻漿后轉移到EP管中,提取液定容至1 mL,蓋緊后4℃浸提24 h,8000 g,常溫離心10 min,取上清液待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上;試劑一和試劑二25℃(室溫)預熱10min以上;
2、取20 μL上清液和180 μL試劑一(相當于稀釋10倍),40℃水浴20min,分別測定530nm和700nm處的吸光值,分別記為A1和A2。
3、取20 μL上清液和180 μL試劑二(相當于稀釋10倍),40℃水浴20min,分別測定530nm和700nm處的吸光值,分別記為A3和A4。
4、計算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注意:如果A1大于1,可以適當加大稀釋倍數,保證總體積200 μL不變,如10 μL上清液和190 μL試劑一(相當于稀釋20倍);如果A1小于0.1,可以適當縮小稀釋倍數,保證總體積不變,如100 μL上清液和100 μL試劑一(相當于稀釋2倍),使A1保持在0.1~1范圍內,可提高檢測靈敏度;同樣調整上清液和試劑二體積比例;計算時以實際稀釋倍數代入下述公式中。
花色苷含量計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
花色苷含量(μg/g干重)=[ΔA×V÷(ε×d)×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W
V:提取液體積,1×10-3L;ε:花色苷的摩爾消光系數,2.69×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;M:花色苷的相對分子質量:449.2g/mol;F:稀釋倍數;106:1g=106μg;W:樣本干重:g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
花色苷含量(μg/g干重)=[ΔA×V÷(ε×d)×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W
V:提取液體積,1×10-3L;ε:花色苷的摩爾消光系數,2.69×104 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;M:花色苷的相對分子質量:449.2g/mol;F:稀釋倍數;106:1g=106μg;W:樣本干重:g。
ΔA線性范圍為0.005-0.5。
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原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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