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| 產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
| 脯氨酸（PRO）含量測定試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63676 |
注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
Pro廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，逆境條件下，植物體內Pro含量顯著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性強的品種往往積累較多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作為抗逆育種的生理指標之一。
測定原理：
用磺基水楊酸（SA）提取Pro，加熱處理后，Pro與酸性茚三酮溶液反應生成紅色；加甲苯萃取后，在520nm測定吸光度。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、冰乙酸25mL、甲苯50mL、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：冰乙酸25 mL×1瓶， 4℃保存。（自備）
試劑二：液體25 mL×1瓶， 4℃保存。
試劑三：甲苯50mL×1瓶，4℃保存。（自備）
樣品測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；之后置95℃水浴振蕩提取10min；10000g，25℃離心10min，取上清，冷卻后待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），勻漿；之后置95℃水浴振蕩提取10min；10000g，25℃離心10min，取上清，冷卻后待測。
2、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），充分混勻，之后置95℃水浴振蕩提取10分鐘，10000g，25℃離心10分鐘，取上清，冷卻后待測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至520nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定：
(1) 取0.25mL樣本+0.25mL試劑一+0.25mL試劑二 于有蓋EP管中，置95℃水浴中保溫30min（蓋緊，防止水分散失），每10min振蕩一次。
(2) 待冷卻后，加入0.5mL試劑三，振蕩30s，靜置片刻，使色素轉至試劑三中；吸取0.2mL上層溶液于微量石英比色皿或96孔板中，于520nm波長處比色，記錄吸光值A。
Pro含量計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、典型回歸方程y = 0.0521x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)
2、按照血清（漿）體積計算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2）=192×(A+0.0021)
3、按照蛋白濃度計算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照樣本質量計算
Pro含量(μg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、典型回歸方程y = 0.02605x - 0.0021 (x為脯氨酸含量，μg/mL；y為吸光值A)
2、按照血清（漿）體積計算
Pro含量(μg/mL)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V3×V1÷V2）=384×(A+0.0021)
3、按照蛋白濃度計算
Pro含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(V1×Cpr)=38.4×(A+0.0021)÷Cpr
4、按照樣本質量計算
Pro含量(μg/g鮮重)= [(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(W×V1÷V2)=38.4×(A+0.0021) ÷W
3、按照細菌或細胞密度計算
Pro含量(μg/104 cell)=[(A+0.0021) ÷0.02605×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0769×(A+0.0021)
V1：加入反應體系中樣本體積，0.25mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
注意：最低檢測限為1μg/mL或1μg /g鮮重 或0.01μg /mg prot
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原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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