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產(chǎn)品名稱(chēng)	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
桑葚過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒	微量法	100管/96樣	CS-01Ｓ63675

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

商品介紹：

測(cè)定原理：

H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出CAT活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制：

工作液：液體24mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至240nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測(cè)定前將CAT檢測(cè)工作液在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

3、準(zhǔn)備96孔UV板一塊（非普通酶標(biāo)板，普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光，不能透過(guò)紫外光，檢測(cè)波長(zhǎng)小于340nm務(wù)必使用UV板）。

4、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，記錄240nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA＝A1-A2。

注意事項(xiàng)：出現(xiàn)負(fù)值怎么辦？

首先檢查吸光值是否超過(guò)3，如果超過(guò)3很可能是沒(méi)有用UV板，請(qǐng)換用UV板。如果未超過(guò)3，仍然出現(xiàn)負(fù)值則檢查反應(yīng)過(guò)程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說(shuō)明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負(fù)值，可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測(cè)。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒(méi)有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負(fù)值，說(shuō)明該樣本測(cè)不到該酶活。

CAT活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=459×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。

CAT(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=918×ΔA÷W

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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