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| 產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
| 過氧化物酶(Peroxidase，POD)試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63672 |
注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
POD（EC
測定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體100μL×1支，4℃保存；
試劑三：液體100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至470nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照2.6（mL）：1.5（μL）：1（μL）的比例混勻；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預熱10min以上；現配現用。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，記錄470nm下1min時吸光值A1和2min后的吸光值A2。計算ΔA＝A2-A1。
注意：
如果ΔA小于0.005，可將反應時間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。
POD活性計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
計算公式：
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =2000×ΔA
2、組織、細菌或細胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =4×ΔA
V反總：反應體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量；500：細菌或細胞總數，500萬。
用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.005÷T =4000×ΔA
2、組織、細菌或細胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =8×ΔA
V反總：反應體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量；500：細菌或細胞總數，500萬。
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原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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