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糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b，GPb）試劑盒微量法100管/48樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63659
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:100管/48樣
  • 采購熱度：353
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：微量法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b，GPb）試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b GPb）試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

糖原磷酸化酶b（Glycogen phosphorylase b，GPb）試劑盒

微量法

100管/48樣

CS-01Ｓ63659

   注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代謝的關鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基，釋放1-磷酸葡萄糖，直至臨近糖原分子α-1，6-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。

商品介紹：

測定原理：

GP催化糖原和無機磷產生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸（5，-AMP）時測定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）時測定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體16 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；

試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑四：粉劑×1支， -20℃保存；

試劑五：粉劑×1支， -20℃保存；

樣本的前處理：

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零；

2、工作液的配制：臨用前將試劑二轉移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

3、試劑三的配制：臨用前在試劑三瓶中加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

4、試劑四的配制：臨用前在試劑四瓶中加入1mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

5、試劑五的配制：臨用前在試劑五管中加入500μL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

6、將工作液、試劑三、試劑四和試劑五置于37℃預熱5分鐘；

7、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三、10μL試劑四、10μL蒸餾水和160μL工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A1和10min后的吸光值A2，計算ΔAGPa=A2-A1。

8、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑三、10μL試劑四、10μL試劑五和160μL工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A3和10min后的吸光值A4，計算ΔAGP=A4-A3。

注意：由于每個樣本需要同時測一個GP（GPa和GPb）活性和一個GPa活性，因此本試劑盒100管測48個樣本。

GPb活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPb（nmol/min/mg prot）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPb（nmol/min/g 鮮重）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷W

V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

b.用96孔板測定的計算公式如下：

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPb（nmol/min/mg prot）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×(ΔAGP－ΔAGPa)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。

GPb（nmol/min/g 鮮重）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1286×(ΔAGP－ΔAGPa)÷W

V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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訂貨流程

產品訂購說明:

  

1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。

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賬 戶 名：上海生物

 

開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部

  

賬 號：2169 2341 6278

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