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標(biāo)簽:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC)試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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詳細(xì)地址：上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661
公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC)試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63653 |
注意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
PEPC（EC
測定原理：
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-，蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm測定NADH減少速率，計算PEPC活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體15 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存；
試劑三 ：原液10μL×1支，4℃保存；
試劑三：稀釋液5mL×1瓶，4℃保存；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟和加樣表：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）取試劑二瓶一瓶，加入6mL試劑一和4.2mL蒸餾水充分混勻，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用。
（2）試劑三工作液的配制：將試劑三原液：試劑三稀釋液=1μL:329μL稀釋，混勻，用多少配多少。
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、20μL試劑三、170μL試劑二，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和5min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
PEPC活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）PEPC活力計算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=643×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PEPC活力計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=643×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位定義：每1萬個細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=1.286×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）PEPC活力計算
單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1286×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PEPC活力計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=1286×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位定義：每1萬個細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
PEPC（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=2.572×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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